Чистую культуру засевают на агар, содержащий 1:50000-1:100000 оптохина. На следующие сутки учитывают результат. Пневмококки не растут в присутствии оптохина.
Можно использовать бумажные диски с 6 мкг оптохина, которые накладываются после посева на поверхность среды (посев лучше производить секторами). У пневмококков вокруг диска образуется зона задержки роста не менее 18 мм.