Принцип. Метод основан на способности микобактерий туберкулеза после окрашивания их фуксином удерживать краситель даже после длительного обесцвечивания в серной кислоте.
Реактивы.
1. 1% раствор основного фуксина. 1 г основного фуксина растирают с 2-3 каплями глицерина, добавляют по капле 10 мл 96% этилового спирта и 90 мл 5% раствора фенола. Раствор оставляют на сутки, затем фильтруют через бумажный фильтр. Хранят в темном месте при комнатной температуре в хорошо закрытой посуде.
2. 5% раствор фенола (карболовой кислоты).
3. 20% серная кислота.
4. Этиловый спирт 96%.
5. Соляная кислота, концентрированная.
6. 0,025% раствор метиленового синего, 0,25 г метиленового синего на 1 л дистиллированной воды.
7. 3% солянокислый спирт. 3 мл концентрированной соляной кислоты доводят до 100 мл этиловым спиртом.
8. Глицерин.
Ход исследования. Материал готовят путем растирания его между двумя стеклами или на обезжиренное стекло наносят осадок исследуемого материала. Препарат высушивают и фиксируют над пламенем горелки.
Окрашивание мазка. На фиксированный препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги размером немного меньше предметного стекла, но так, чтобы она закрыла мазок полностью. Наливают на нее раствор карболового фуксина и нагревают препарат над пламенем горелки до появления паров. Остудив препарат, снимают пинцетом бумажку и смывают остатки краски водой. Мазок обесцвечивают в 20% серной кислоте или в 3% солянокислом спирте до слегка розовато-сероватого цвета и тщательно промывают водой. Обесцвеченный мазок подкрашивают в течение 30 секунд 0,025% раствором метиленового синего. Микроскопируют с иммерсией.
Микобактерии туберкулеза окрашиваются в красный цвет, а другие микробы и клеточные элементы - в голубой.