Дифференциация энтерококков внутри группы
Виды и подвиды | Резистентность к теллуриту калия | Энтерококковая дифференциально-диагностическая среда | Подвижность в 0,2% агаре | ||
редукция ТТХ | гемолиз | протеолиз | |||
S. faecalis | + | + | - | - | - |
S. faecalis subsp. zymogenes | + | + | + | +/- | - |
S. faecalis subsp. liquefaciens | + | + | - | + | - |
S. faecium | - | - | +/- | - | - |
Подвижные энтерококки | + | + | +/- | - | + |
Первый день. Бульонные культуры энтерококков для установления их видовой принадлежности высевают параллельно на 3 среды:
а) на энтерококковую дифференциально-диагностическую среду (ЭДДС) для определения гемолитической, протеолитической активности и способности редуцировать ТТХ;
б) на сахарно-дрожжевой агар для испытания резистентности исследуемой культуры к теллуриту калия;
в) в столбик с 0,2% агаром для определения подвижности энтерококков.
Второй день. 1. Через 15-18 часов предварительно учитывают гемолитическую активность энтерококков, ввиду того, что при инкубации в термостате многие штаммы энтерококков вырабатывают кислые продукты метаболизма со снижением pH питательной среды до 3,8-4,2, разрушением гемоглобина и появлением вокруг колоний зон бурого цвета.
При учете ферментативной (гемолитической и протеолитической) активности определяется 4 возможных варианта изменения ЭДДС:
а) гемолитически активные штаммы энтерококков образуют вокруг колоний белые зоны, соответствующие цвету молочного агара;
б) у протеолитически активных штаммов появляются четко-выраженные темно-красные или бурые зоны вокруг колоний;
в) при наличии обоих (гемолитического и протеолитического) ферментов, среда вокруг колоний просветляется, приобретая вид обычного питательного агара;
г) штаммы энтерококков, не продуцирующие этих ферментов, сред не изменяют.
В конце первых суток инкубации учитывают на этой же среде способность исследуемых культур к редукции 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ). S. faecalis и его варианты (S. faecalis subsp. zymogenes, S. faecalis subsp. liquefaciens), восстанавливающие ТТХ, растут в виде вишнево-красных колоний с белыми ободками.
Вид S. faecium не восстанавливает ТТХ - колонии его бесцветны или окрашены в слабо-розовый цвет.
Подвижные формы энтерококков, обладая слабой редуцирующей активностью, образуют (особенно в первичном посеве материала) карликовые колонии розовых оттенков разной интенсивности.
2. На сахарно-дрожжевом агаре с теллуритом калия (0,07%) растут только штаммы вида S. faecalis, устойчивые к высоким концентрациям теллурита калия. В процессе роста они восстанавливают теллурит калия, образуя при этом черные колонии, окруженные узким бесцветным ободком.
3. В полужидком (0,2%) агаре, засеянном уколом, подвижные формы энтерококков вызывают диффузное помутнение всего столбика среды, тогда как неподвижные виды (S. faecium, S. faecalis и его разновидности) растут только по ходу прокола.
Таким образом, основными тестами дифференциации видов S. faecalis, S. faecium являются редукция ТТХ и устойчивость к теллуриту калия.
S. faecalis и его варианты: S. faecalis zymogenes, S. faecalis liquefaciens различаются по образованию гемолитического и протеолитического ферментов.
Основным диагностическим признаком подвижных энтерококков, позволяющим дифференцировать их от всех остальных видов этой группы, является подвижность.