Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений (не действует на территории РФ на основании приказа Минздрава России от 24.08.2020 N 889)

2. Определение редукции нитритов

Принцип. Метод основан на способности микроорганизмов восстанавливать соли азотной кислоты (нитриты) до аммиака, гидроксиламина, окиси азота, двуокиси азота, молекулярного азота.

Ингредиенты:

бактопептон;

калий азотистокислый (KNO);

сульфаниловая кислота;

альфа-нафтиламин;

уксусная кислота - 5 моль/л.

Приготовление нитритного бульона. Берут калий азотистокислый (KNO) - 0,2 г, добавляют бактопептона - 5,0 г, воды дистиллированной - до 1000 мл, pH 7,4. Нитритный бульон разливают в химически чистые пробирки с поплавками по 5 мл. Автоклавируют при 0,5 атм. (115°C) в течение 20 минут.

Приготовление реактива Грисса (см. определение редукции нитратов).

Ход исследования. Перед посевом в среду добавляют 20% инактивированной сыворотки. Посевы выдерживают в термостате при 37°C в течение 5-7 дней. После инкубации в каждую пробирку с культурой вносят реактив Грисса (по 0,1 мл смеси равных объемов реактивов 1 и 2, которые смешивают непосредственно перед употреблением).

Оценка результатов. Красное окрашивание - реакция отрицательная; отсутствие красного окрашивания указывает на восстановление нитритов - реакция положительная; наличие газа в поплавке при отсутствии окрашивания, редукция нитритов до газообразных компонентов - реакция слабоположительная.