ГОСТ 34899-2022 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Сенсибилизация кожи in chemico. Методы, основанные на ключевых событиях пути неблагоприятного исхода при ковалентном связывании с белками

     3 Методы

3.1 Обоснование и принципы методов испытаний, представленных в настоящем стандарте по проведению испытаний на основе ключевых событий

3.1.1 В настоящее время к таким методам относятся:

- метод прямого анализа реакционной способности пептидов (Direct Peptide Reactivity Assay - DPRA) (3.2);

- метод анализа реакционной способности производных аминокислот (Amino acid Derivative Reactivity Assay - ADRA) (3.3);

- метод кинетического прямого анализа реакционной способности пептидов (kinetic Direct Peptide Reactivity Assay - kDPRA) (3.4).

3.1.2 Перечисленные методы in chemico основаны на использовании реакции ковалентного связывания с белками и считаются научно обоснованными. Метод DPRA прошел оценку в референтной лаборатории Европейского союза по альтернативным методам испытаний на подопытных животных (European Union Reference Laboratory for Alternatives to Animal Testing - EURL ECVAM) и дальнейшую независимую экспертную оценку в Научно-консультативном комитете EURL ECVAM (ESAC) [3-5]. Для метода ADRA аналогичным образом было проведено валидационное исследование [6-9] с последующим вынесением независимой экспертной оценки [10], координатором которого выступил Японский центр по валидации альтернативных методов (Japanese Center for the Validation of Alternative Methods - JaCVAM). Метод kDPRA был подвергнут валидационному исследованию и представлен к независимой экспертной оценке при участии в качестве координаторов соответствующих заинтересованных предприятий промышленности [17].

3.1.3 Методы исследований, включенные в настоящий стандарт, могут различаться в части содержания процедур, используемых для получения необходимой информации, однако применение любого из них обеспечивает выполнение установленных на национальном уровне требований к результатам испытаний химических веществ на их способность реагировать с белками, чему в значительной степени способствует соблюдение принципа взаимного признания данных.

3.1.4 Корреляция реактивности белка с потенциалом сенсибилизации кожи хорошо известна. [18-20]. Тем не менее, исходя из того, что реакции с белками представляют собой лишь одно из ключевых событий АОР для сенсибилизации кожи [2], [21], сведения, получаемые с помощью методов исследований, разработанных специально для наблюдения за данным ключевым событием, могут оказаться недостаточными в случае их самостоятельного применения для подготовки заключения о наличии или отсутствии у этих веществ способности оказывать сенсибилизирующее воздействие на кожу. Поэтому данные, полученные с помощью методов испытаний, описанных в настоящем стандарте, предлагается рассматривать в рамках Интегрированного подхода к испытаниям и оценке (IATA) вместе с прочей соответствующей дополнительной информацией, полученной в результате применения методов испытаний in vitro, характеризующей иные ключевые события АОР для сенсибилизации кожи, а также информацией, полученной с применением методов, не предусматривающих непосредственного проведения испытаний, таких как компьютерное моделирование in silico или сопоставление по методу аналогий с химической продукцией, обладающей схожими химическими свойствами [21]. Опубликованы примеры использования данных, полученных с применением этих методов в рамках так называемых установленных подходов (Defined Approach - DA), т.е. подходов, стандартизированных как с точки зрения набора используемых источников информации, так и с точки зрения порядка формирования прогнозного заключения [21], которые также могут быть востребованы при выполнении работ в рамках IATA.

3.1.5 Методы исследований DPRA и ADRA, описанные в 3.2 и 3.3, обеспечивают возможность классификации химической продукции, способной (класс опасности 1 согласно СГС ООН) и не способной вызывать сенсибилизацию кожи. При условии, что это не противоречит требованиям действующего законодательства, положительные результаты, полученные с помощью этих методов, могут сами по себе рассматриваться как достаточное основание для отнесения химической продукции к классу опасности 1. В то же время указанные методы не подлежат самостоятельному применению для целей классификации сенсибилизирующей химической продукции в соответствии с подклассами опасности 1A и 1B [22], как предусмотрено СГС ООН [1] для нужд официальных органов, контролирующих эти два необязательных подкласса опасности, а также не могут применяться для целей прогнозирования способности исследуемой химической продукции вызывать сенсибилизацию кожи в процессе принятия решений по оценке необходимых мер безопасности при обращении с этой продукцией.

3.1.6 В свою очередь, метод kDPRA, описанный в 3.4, позволяет достоверно квалифицировать химическую продукцию, способную вызвать сенсибилизацию кожи и подлежащую отнесению к подклассу опасности 1A согласно СГС ООН, и химическую продукцию, не подлежащую отнесению к данному подклассу опасности (т.е. вне подкласса опасности 1A), а именно такую, которая должна классифицироваться как принадлежащая к подклассу опасности 1B или не имеющая класс опасности [1], но при этом не может применяться для целей определения сенсибилизирующей (класс опасности 1) и несенсибилизирующей химической продукции. При условии, что это не противоречит требованиям действующего законодательства, положительные результаты, полученные с помощью метода kDPRA, могут сами по себе рассматриваться как достаточное основание для отнесения химической продукции к подклассу опасности 1А согласно СГС ООН.

3.1.7 Определения соответствующих терминов даны в разделе 2. Разработаны соответствующие стандарты результативности для оценивания предлагаемых идентичных или модифицированных методов исследований для определения сенсибилизации кожи in vitro, в основе которых лежат DPRA и ADRA [23].

3.2 Сенсибилизация кожи in chemico. Прямой анализ реакционной способности в отношении пептидов (DPRA)

3.2.1 Исходные положения, пригодность и ограничения

3.2.1.1 Метод DPRA предназначен для определения исходного молекулярного события АОР для сенсибилизации кожи, а именно реакций с белками, путем количественной оценки реакционной способности исследуемой химической продукции по отношению к модельным синтетическим пептидам, в состав которых входит лизин либо цистеин [27]. В основу метода положен анализ значений показателей деплеции (обеднения) производных цистеина и лизина с целью последующего отнесения исследуемой химической продукции к продукции, способной и не способной вызывать сенсибилизацию кожи [28].