ГОСТ 34899-2022

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Сенсибилизация кожи in chemico. Методы, основанные на ключевых событиях пути неблагоприятного исхода при ковалентном связывании с белками

Methods for studying the effects of chemicals on the human body In Chemico Skin Sensitisation. Methods based on key events in the pathway of adverse outcomes in covalent binding to proteins

МКС 71.040.10;

         13.020.01

Дата введения 2024-05-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены".

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 сентября 2022 г. N 154-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2023 г. N 1411-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34899-2022 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2024 г.

Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному документу OECD 442с:2021* "Руководство по тестированию химической продукции. Сенсибилизация кожи in chemico. Методы, направленные на ключевое событие пути неблагоприятного исхода при ковалентном связывании с белками" ("OECD Guidelines for the testing of chemicals - Key event-based test guideline for in chemico skin sensitisation assays addressing the adverse outcome pathway key event on covalent binding to proteins, MOD) путем изменения его структуры для приведения в соответствие с правилами, установленными в ГОСТ 1.5 (подразделы 4.2 и 4.3).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

5 Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для увязки с наименованиями, принятыми в существующем комплексе межгосударственных стандартов.

Международный документ разработан Международной организацией экономического сотрудничества и развития (OECD).

Сопоставление структуры настоящего стандарта со структурой указанного международного документа приведено в дополнительном приложении ДА.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Руководство по проведению испытаний на основе ключевых событий при ковалентном связывании с белками

Под веществом, способным вызывать сенсибилизацию кожи, в соответствии с положениями Согласованной на Глобальном уровне Системы классификации и маркировки химической продукции Организации Объединенных Наций (СГС ООН) [1], принято понимать вещество, воздействие которого при его повторном контакте с кожей может приводить к развитию аллергической реакции. Существует соглашение относительно ключевых биологических событий, лежащих в основе появления сенсибилизации кожи. Совокупность имеющихся знаний о химических и биологических процессах, связанных с сенсибилизацией кожи, в обобщенном виде представлена как описание соответствующего пути неблагоприятного исхода (Adverse Outcome Pathway - АОР) [2], начинающегося с исходного молекулярного события, включающего ряд промежуточных событий, и заканчивающегося неблагоприятным исходом, а именно появлением признаков аллергического контактного дерматита. Данный АОР фокусирует внимание на такой химической продукции, которая реагирует с аминокислотными остатками (т.е. цистеином или лизином), например органической. В данном случае в роли исходного молекулярного события (т.е. первого ключевого события) выступает реакция ковалентного связывания электрофильных веществ с нуклеофильными центрами белков кожи. Второе ключевое событие в данном АОР развивается в кератиноцитах и включает как воспалительный ответ, так и изменения в экспрессии генов, связанных со специфическими путями передачи сигналов клеток, такими как пути, зависящие от элемента антиоксидантного/электрофильного ответа (antioxidant/electrophile response element - ARE). Третьим ключевым событием является активация дендритных клеток, и обычно она оценивается по экспрессии специфических поверхностных клеточных маркеров, хемокинов и цитокинов. Четвертое ключевое событие - это пролиферация Т-клеток.

Оценивание сенсибилизации кожи обычно проводится с использованием лабораторных животных. Классические методы исследований с использованием подопытных морских свинок, максимизационная сенсибилизирующая проба на морских свинках (Guinea Pig Maximisation Test - GPMT) Магнуссона и Клигмана либо тест Бюлера [11] позволяют оценить как фазу индукции, так и контрольную фазу исследования сенсибилизации кожи. Методы исследований с использованием мышей, такие как LLNA [12] и три его модификации, для которых не требуется применение радиоактивных веществ - LLNA:DA [13], LLNA:BrdU-ELISA и BrdU-FCM [14], оценивают только индукционный ответ и поэтому заслужили признание по сравнению с испытаниями на морских свинках с точки зрения меньшего нанесения вреда животным в сочетании с возможностью получения объективных данных измерений, иллюстрирующих течение фазы индукции для сенсибилизации кожи.

Методы исследований in chemico и in vitro, основанные на механизмах, касающихся первых трех ключевых событий АОР для сенсибилизации кожи, были приняты с целью содействия оценке потенциала опасности химической продукции для сенсибилизации кожи: настоящий метод исследования обеспечивает получение требуемой оценки исходя из данных о ковалентном связывании с белками, что соответствует первому ключевому событию; в центре внимания [15] находится процесс активации кератиноцитов [15], т.е. второе ключевое событие, а [16] в свою очередь рассказывает об активации дендритных клеток [16], третьем ключевом событии АОР для сенсибилизации кожи. Четвертое ключевое событие заключается в пролиферации Т-клеток, оценивается косвенным образом - по методу изучения реакции регионарных лимфатических узлов (Local Lymph Node Assay - LLNA), с использованием подопытных мышей [12].

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает методы испытаний in chemico, направленные на изучение механизмов, действием которых обусловлено первое ключевое событие АОР для кожной сенсибилизации, а именно ковалентное связывание с белками [2].

     2 Термины, определения и сокращения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 вещество (substance): Химические элементы и их соединения, представленные в естественном состоянии или полученные при выполнении производственного процесса, включая любые добавки, необходимые для сохранения стабильности продукта, а также любые примеси, наличие которых обусловлено применяемым процессом, но исключая любые растворители, удаление которых не сказывается на стабильности вещества или на его составе [25].

2.2 воспроизводимость (reproducibility): Согласованность результатов, получаемых при повторном испытании одного и того же вещества с применением одного и того же протокола (см. "Надежность") [24].

2.3 вычисления (calculating)

Вычисление деплеции (обеднения) NAC или NAL

Деплецию (обеднение) вычисляют следующим образом:

Вычисление достоверности прогнозирования

Значения чувствительности, специфичности и точности метода вычисляют исходя из имеющегося количества истинноположительных (true positive - TP), истинноотрицательных (true negative - TN), ложноотрицательных (false negative - FN) и ложноположительных (false positive - FP) результатов.

,

.

2.4 градуировочная кривая (calibration curve): Отношение между экспериментальным значением отклика и аналитической концентрацией (также называемой стандартной кривой) известного вещества.

2.5 достоверный метод исследования (valid test method): Метод исследования, признаваемый в достаточной степени релевантным и надежным для применения в конкретной области и базирующийся на научно обоснованных принципах. Ни один метод исследования не является достоверным в абсолютном смысле и может рассматриваться как таковой только для ограниченной области применения [24].

2.6 интегрированный подход к испытаниям и оценке; IATA (Integrated Approach on Testing and Assessment): Структурированный подход, служащий для определения степени опасности (потенциала), описания характера опасности (способности) и/или оценивания безопасности (в зависимости от потенциала/способности и экспозиции) химической продукции или групп химической продукции, который заключается в стратегическом интегрировании и взвешивании всех значимых данных для обобщения информации с целью принятия решения нормативного характера о потенциальной опасности, рисках и необходимости проведения дальнейших целенаправленных и, соответственно, минимально достаточных по объему испытаний.

2.7 исследуемая химическая продукция (test chemical): Химическая продукция (вещества или смеси), которая подвергается испытаниям.

2.8 исходное молекулярное событие (molecular initiating event): Вызванное воздействием химического вещества нарушение в биологической системе, наблюдаемое на молекулярном уровне и определяемое как исходное событие в пути неблагоприятного исхода.

2.9 контрольная проба (reference control): Ничем не обработанная проба, включающая в себя все составляющие испытательной системы, содержащая растворитель или вещество-носитель и используемая наряду с пробами, содержащими исследуемое химическое вещество, и другими контрольными пробами для определения базового отклика для образцов, обработанных исследуемым химическим веществом, разведенным в том же растворителе или веществе-носителе. При параллельном использовании с отрицательной контрольной пробой также позволяет выяснить, взаимодействует ли растворитель или вещество-носитель с испытательной системой.

2.10 коэффициент вариации (coefficient of variation): Мера изменчивости, рассчитываемая для группы данных, характеризующих параллельно обрабатываемые пробы, путем деления значения стандартного отклонения на среднее значение. Значение данного коэффициента может быть выражено в процентах при умножении на 100.

2.11 многокомпонентное вещество (multi-constituent substance): Вещество, характеризуемое количественным составом, в котором две или более основные структурные составляющие содержатся в количестве 10% (по массе), но <80% (по массе). Образование многокомпонентного вещества происходит в процессе производства. Различие между смесью и многокомпонентным веществом состоит в том, что смесь образуется путем соединения двух или более веществ при отсутствии химической реакции. Многокомпонентное вещество, напротив, образуется в результате химической реакции.

2.12 надежность (reliability): Показатель того, что метод испытаний может быть реализован с получением воспроизводимых результатов в рамках одной или различных лабораторий в течение продолжительного времени при применении одного и того же протокола. Он оценивается путем вычисления внутри- и межлабораторной воспроизводимости и внутрилабораторной повторяемости [24].

2.13 однокомпонентное вещество (mono-constituent substance): Вещество, характеризуемое количественным составом, в котором одна основная структурная составляющая содержится в количестве не менее чем 80% (по массе).

2.14 опасность (hazard): Изначально присущее свойство конкретной химической продукции или ситуации, заключающееся в их потенциальной способности вызывать деструктивные последствия в случаях, когда организм, система или субпопуляция подвергаются их воздействию.

2.15 положительная контрольная проба (positive control): Используемая параллельно проба, содержащая все компоненты испытательной системы и обрабатываемая с использованием вещества, заведомо дающего положительный отклик. Чтобы обеспечить возможность учитывать изменчивость во времени ответа, получаемого для данной пробы, этот положительный отклик не должен быть слишком завышенным.

2.16 прегаптены (pre-haptens): Химическая продукция, приобретающая сенсибилизирующие свойства в результате абиотической трансформации.

2.17 пригодность системы (system suitability): Заключение о рабочих характеристиках прибора (например, чувствительности) по результатам анализа стандартного раствора, выполняемого до начала испытания аналитической партии [26].

2.18 прогаптены (pro-haptens): Химическая продукция, требующая ферментной активации для реализации своего сенсибилизирующего потенциала при воздействии на кожу.

2.19 путь неблагоприятного исхода (Adverse Outcome Pathway - АОР): последовательность событий, начиная с особенностей химической структуры, характерных для целевого химического вещества или группы однотипных химических веществ, включая исходное молекулярное событие и заканчивая неблагоприятным исходом, который можно наблюдать in vivo [2].

2.20 релевантность (relevance): Характеристика соответствия метода испытаний результату, полученному при исследованиях, а также его обоснованности и пригодности для определенных целей применения. Данная характеристика указывает пределы, в которых метод испытаний позволяет правильно измерить или спрогнозировать исследуемый биологический эффект. Релевантность включает рассмотрение точности (соответствия) метода испытаний [24].

2.21 смесь (mixture): Смесь или раствор, состоящие из двух или более веществ, в которых они не вступают в реакцию друг с другом [25].

2.22 Согласованная на Глобальном уровне Система классификации и маркировки химической продукции (ООН); СГС (Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals (UN); GHS): Система, предусматривающая классификацию химической продукции (веществ и смесей) в зависимости от характерных видов и уровней физической опасности, опасности для здоровья человека или опасности для окружающей среды, с применением соответствующих средств информирования, таких как пиктограммы, сигнальные слова, краткая характеристика опасности, меры по предупреждению опасности и паспорта безопасности, чтобы обеспечить информацией о ее негативном воздействии с целью защиты людей (в том числе сотрудников, работников, перевозчиков, потребителей и представителей аварийных служб) и окружающей среды [25].