ГОСТ 34896-2022 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Сенсибилизация кожи in vitro. Метод определения люциферазы ARE-Nrf2

Введение

Активация кератиноцитов. Руководство по проведению испытаний на основе ключевых событий

Под веществом, способным вызвать сенсибилизацию кожи в соответствии с положениями Согласованной на Глобальном уровне Системы классификации и маркировки химических веществ Организации Объединенных Наций (СГС ООН) [1], принято понимать вещество, воздействие которого при его повторяющемся контакте с кожей может приводить к развитию аллергической реакции. Существует соглашение среди специалистов относительно ключевых биологических событий, лежащих в основе появления сенсибилизации кожи. Современные знания о химических и биологических пределах, связанных с сенсибилизацией кожи, были обобщены в виде пути неблагоприятного исхода (АОР) [2], начинающегося с исходного молекулярного события, включающего промежуточные события, и заканчивающегося неблагоприятным исходом, а именно появлением признаков аллергического контактного дерматита. Данный АОР предназначен для химической продукции, которая реагирует с тиолами (т.е. цистеином) и первичными аминами (т.е. лизином), например органической. В данном случае в роли исходного молекулярного события (т.е. первого ключевого события) выступает реакция ковалентного связывания электрофильных веществ с нуклеофильными центрами белков кожи. Второе ключевое событие в данном АОР развивается в кератиноцитах и включает как воспалительный ответ, так и изменение в экспрессии генов, связанное специфическим путем передачи сигналов клеток, таких как пути, зависящие от элемента антиоксидантного/электрофильного ответа (antioxidant/electrophile response element - ARE). Третьим ключевым событием является активация дендритных клеток, и обычно она оценивается по экспрессии специфических поверхностных клеточных маркеров, хемокинов и цитокинов. Четвертое ключевое событие - это пролиферация Т-клеток [3].

Испытания in vitro методом KeratinoSens™ на основе сигнального пути ARE-Nrf2 с использованием люциферазы считаются научно обоснованными. Метод KeratinoSens™ первым был подвергнут валидационным испытаниям с последующим вынесением независимой экспертной оценки Научно-консультативным комитетом EURL ECVAM (ESAC) и получением официального одобрения со стороны EURL ECVAM, что позволило в дальнейшем рассматривать данный метод в качестве валидированного референтного метода (validated reference method - VRM) [3], [4], [5], [6]. Метод LuSens на основе сигнального пути ARE-Nrf2 с использованием люциферазы также был подвергнут валидационному испытанию с применением действующих стандартов результативности, результаты которого после проведенного анализа легли в основу еще одного положительного заключения ESAC [7], [8], [9], [10].

Методы испытаний, включенные в настоящий стандарт, могут различаться как в части содержания процедур, используемых для получения необходимой информации, так и в части выбора измеряемых показателей. Применение любого из них обеспечивает выполнение установленных на национальном уровне требований к результатам испытаний химической продукции на способность вызывать активацию кератиноцитов, выступающую в качестве одного из ключевых событий АОР для сенсибилизации кожи, чему в значительной степени способствует соблюдение принципа взаимного признания данных.