ГОСТ 34736-2021 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Метод испытаний с использованием извлеченного глаза курицы для определения химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, и химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз

     5 Сущность метода испытаний

Метод ICE предполагает использование органотипической модели, обеспечивающей кратковременное поддержание жизнеспособности образца глаза курицы in vitro. В соответствии с данным методом повреждение после воздействия исследуемой химической продукцией оценивают, исходя из степени отечности роговицы, изменения ее прозрачности и способности удерживать флуоресцеин. В дополнение могут проводиться гистологические исследования для повышения чувствительности метода для отнесения моющих средств и сурфактантов, не обладающих экстремальными значениями pH (2<pH<11,5), к классу опасности 1 согласно СГС ООН [10]. В то время как определение отечности роговицы является количественной оценкой, сведения об изменении прозрачности, способности удерживать флуоресцеин и появляющихся гистологических изменениях тканей используются для качественной оценки наблюдаемого воздействия. Результат каждого определения либо преобразуется в количество баллов, учитываемое в ходе присвоения химической продукции определенного класса ICE (от I до IV), либо используется непосредственно для отнесения ее по качественному признаку на основании испытаний in vitro к классу опасности по воздействию на глаза, т.е. принадлежащей к классу опасности 1 согласно СГС ООН или к химической продукции, для которой класс опасности отсутствует согласно СГС ООН (см. критерии принятия решений). В то же время при применении метода ICE не представляется возможным спрогнозировать степень опасности в отношении химической продукции, которую не идентифицируют как относящуюся к классу опасности 1 согласно СГС ООН или как не имеющую класса опасности согласно СГС ООН (см. 3.7). В этих случаях полученный результат испытаний по методу ICE "Прогнозирование не представляется возможным" подразумевает необходимость сбора дополнительной информации для дальнейшей классификации исследуемой продукции (подробнее см. [7]).

5.1 Происхождение образцов глаз курицы и возраст особей, используемых для получения образцов

5.1.1 Согласно установившейся практике для испытаний обычно используются образцы глаз, отбираемые при убое птицы, который производится с целью последующего потребления мяса птицы человеком, что избавляет от необходимости задействовать для этой цели лабораторных животных. Источником образцов могут служить только здоровые птицы, мясо которых пригодно для включения в рацион человека.

5.1.2 Поскольку контролируемые исследования по определению оптимального возраста кур для отбора у них образцов глаз до настоящего времени не проводились, возраст и масса используемых птиц должны соответствовать возрасту цыплят-бройлеров, подлежащих убою в традиционной практике птицеводства (т.е. приблизительно 7 недель, 1,5-2,5 кг).

5.2 Отбор образцов глаз и их транспортировка в лабораторию

5.2.1 Голову птицы следует отделять от тушки сразу после того, как курица была каким-либо из доступных гуманных способов оглушена и горло ее было перерезано с целью обескровливания. Упомянутые гуманные способы включают в себя оглушение электрическим током, а также оглушение в контролируемой атмосфере, при условии, что может быть доказано отсутствие отрицательного влияния данного процесса на качество получаемых образцов глаз. Бойня, поставляющая образцы, должна быть расположена таким образом, чтобы доставка голов в лабораторию могла осуществляться в достаточно короткий срок, снижающий вероятность их порчи и/или бактериального заражения. Промежуток времени между отбором куриных голов и помещением извлеченных из них образцов глаз в камеру суперфузии должен быть минимальным (обычно не более двух часов), чтобы гарантировать соблюдение критериев приемлемости. Все образцы глаз, используемые при испытаниях, должны представлять одну и ту же группу образцов, отобранных в один и тот же день.

5.2.2 Поскольку препарирование глаз осуществляется непосредственно в лаборатории, взятые на бойне неповрежденные головы транспортируют при температуре окружающего воздуха (обычно от 18°C до 25°C) в пластиковых боксах, используя для увлажнения ткань, смоченную изотоническим физиологическим раствором.

5.3 Критерии выбора и количество образцов глаз для проведения исследования по методу ICE

5.3.1 Образцы глаз, которые после извлечения демонстрируют высокое исходное значение показателя способности удерживать флуоресцеин (т.е. >0,5) или показателя непрозрачности (т.е. >0,5), отбраковывают.

5.3.2 Каждая обрабатываемая исследуемой химической продукцией "опытная" группа образцов и параллельно используемая положительная контрольная проба должны состоять не менее чем из трех образцов глаз. Для отрицательной контрольной пробы или контроля растворителя (если в качестве растворителя не используется физиологический раствор) используют как минимум один образец.

5.3.3 В случае если исследуется твердая химическая продукция и полученный для нее результат позволяет отнести ее к химической продукции, для которой класс опасности согласно СГС ООН отсутствует, испытания рекомендуется провести повторно на трех дополнительных образцах глаз, чтобы окончательно подтвердить или опровергнуть данное отрицательное заключение.