ГОСТ 34735-2021 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Методы испытаний с применением реконструированного рогового эпителия человека (RhCE) для определения химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз (с Поправкой)

Параметр

Протокол выполнения измерений согласно руководству FDA [43], [45]

Критерии приемлемости

Избирательность

Исследование изопропанола, холостой пробы на основе жизнеспособных тканей (изопропанолового экстракта из жизнеспособных тканей RhCE, не подвергавшихся какой-либо обработке), холостой пробы на основе нежизнеспособных тканей (изопропанолового экстракта нежизнеспособных тканей RhCE, не подвергавшихся какой-либо обработке) и красителя (например, метиленового синего)

20% от

Прецизионность

Контроль качества (т.е. растворы МТТ-формазана концентрацией 1,6; 16 и 160 мкг/мл) в изопропаноле (n=5)

CV15% или 20% для LLOQ

Точность

Контроль качества с использованием изопропанола (n=5)

% Dev15% или 20% для LLOQ

Влияние матрицы

Контроль качества с холостой пробой на основе жизнеспособных тканей (n=5)

85%%Влияние матрицы115%

Перенос (следы предыдущей пробы)

Анализ изопропанола после анализа стандартного раствора для ULOQ

20% от

Воспроизводимость (в течение дня)

3 отдельные кривые градуировки (для 6 последовательно разбавленных 1:3 растворов

MTT-формазана в изопропаноле, начиная с ULOQ, т.е. 200 мкг/мл). Контроль качества с использованием изопропанола (n=5)

Градуировочные кривые:

% Dev15% или 20% для LLOQ.

Контроль качества:

Воспроизводимость (в разные дни)

День 1: 1 калибровочная кривая и контроль качества с использованием изопропанола (n=3).

День 2: 1 калибровочная кривая и контроль качества с использованием изопропанола (n=3).

День 3: 1 калибровочная кривая и контроль качества с использованием изопропанола (n=3)

% Dev15% и

CV15%

Краткосрочная стабильность

MTT-формазана в экстракте тканей RhCE

Холостые пробы для контроля качества на основе жизнеспособных тканей (n=3) анализируют в день приготовления и спустя 24 ч хранения при комнатной температуре

% Dev15%

Долгосрочная стабильность

MTT-формазана в экстракте ткани RhCE (при необходимости)

Холостые пробы для контроля качества на основе жизнеспособных тканей (n=3) анализируют в день приготовления и спустя несколько дней хранения при температуре 20°C

% Dev15%

      LLOQ: (Lower Limit of Quantification) - нижний предел количественного определения, который должен соответствовать от 1% до 2% показателя жизнеспособности тканей, т.е. 0,8 мкг/мл.

      ULOQ (Upper Limit of Quantification) - верхний предел количественного определения, который должен соответствовать не менее чем двухкратному значению максимальной предполагаемой концентрации МТТ-формазана в изопропаноловых экстрактах для отрицательных контрольных проб (~70 мкг/мл для VRM), т.е. 200 мкг/мл.