Точный
Статус документа
Статус документа

ГОСТ 34735-2021 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Методы испытаний с применением реконструированного рогового эпителия человека (RhCE) для определения химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз

     3 Исходные положения

3.1 В методах настоящего стандарта используются поставляемые на рынок трехмерные модели тканей RhCE, основой для получения которых являются первичные эпидермальные кератиноциты человека (EpiOcular OCL-200), иммортализованные эпителиальные клетки роговицы человека (SkinEthic HCE/S) либо первичные эпителиальные клетки роговицы человека (LabCyte CORNEA-MODEL24 и MCTT HCE). Модели тканей EpiOcular OCL-200, SkinEthic HCE/S, LabCyte CORNEA-MODEL24 и MCTT HCETM имеют трехмерную структуру, аналогичную структуре эпителия роговицы, наблюдаемой in vivo, и выращиваются с использованием клеток соответствующих видов [25]-[28]. Методы испытаний с использованием данных моделей тканей позволяют непосредственно определять цитотоксическое воздействие, связанное с проникновением химической продукции в роговицу и повреждением клеток и тканей вследствие дальнейшего контакта с ней, по результатам которых может быть сделан вывод о серьезном повреждении/раздражении глаз in vivo. Нарушение жизнедеятельности клеток может быть вызвано несколькими механизмами действия (см. 4.2), однако именно цитотоксическое действие имеет чрезвычайно большое, если не решающее значение для определения общей способности химической продукции вызывать серьезное повреждение/раздражение глаз, основными признаками которого in vivo обычно являются помутнение роговицы, воспаление радужной оболочки и покраснение и/или отек конъюнктивы, вне зависимости от того, какими именно физико-химическими процессами была обусловлена подобная реакция.

3.2 В рамках валидационных исследований методов испытаний настоящего стандарта было испытано большое количество химической продукции, принадлежащей к различным классам, различающейся по значению молекулярной массы и LogP, химической структуре и т.д. Базовый перечень химической продукции, применявшейся для валидации метода EpiOcular EIT, включал 113 наименований химической продукции, представляющих 95 различных органических функциональных групп, о чем свидетельствуют данные анализа с применением программного инструментария QSAR, разработанного [9]. В перечень в основном были включены однокомпонентные вещества, однако некоторое количество многокомпонентных веществ (включая 3 гомополимера, 5 сополимеров и 10 квазиполимеров) также использовалось в валидационных исследованиях. По своему агрегатному состоянию и присвоенному классу опасности согласно СГС ООН химическая продукция (113 наименований) распределилась следующим образом: 13 жидкостей класса опасности 1, 15 твердых продуктов класса опасности 1, 6 жидкостей подкласса опасности 2A, 10 твердых продуктов подкласса опасности 2A, 7 жидкостей подкласса опасности 2B, 7 твердых продуктов подкласса опасности 2B, 27 жидкостей и 28 твердых продуктов, для которых класс опасности отсутствует [8]. Базовый перечень химической продукции, применявшейся для валидации метода SkinEthic HCE EIT, насчитывал 200 наименований химической продукции, представляющей 165 различных органических функциональных групп [9], [11], [12]. Хотя большинство позиций в перечне занимали однокомпонентные вещества, некоторое количество многокомпонентных веществ (включая 10 полимеров) также было включено в валидационное исследование. По своему агрегатному состоянию и присвоенному классу опасности согласно СГС ООН химическая продукция (200 наименований) распределилась следующим образом: 27 жидкостей класса опасности 1, 24 твердых продуктов класса опасности 1, 19 жидкостей подкласса опасности 2A, 10 твердых продуктов подкласса опасности 2A, 9 жидкостей подкласса опасности 2B, 8 твердых продуктов подкласса опасности 2B, 50 жидкостей и 53 твердых продукта, для которых класс опасности отсутствует [11], [12]. Базовый перечень химической продукции, применявшийся для последующей валидации метода CORNEA-MODEL24 EIT, насчитывал 30 наименований эталонной химической продукции, перечисленной в стандартах результативности [23] для методов настоящего стандарта. Базовый перечень химической продукции, применявшейся параллельно для валидации метода MCTT HCE EIT, также насчитывал 30 наименований эталонной химической продукции, перечисленной в стандартах результативности [23] для настоящего стандарта.

3.3 Методы настоящего стандарта применимы для испытаний веществ и смесей, которые являются жидкостями, твердыми, полутвердыми и воскоподобными продуктами. Жидкости могут иметь водную или неводную основу; твердые вещества могут быть растворимыми или нерастворимыми в воде. Твердые вещества по возможности перед испытанием должны быть измельчены до тонкого порошкообразного состояния; никакой другой предварительной обработки пробы не требуется. Работы по валидации методов настоящего стандарта для газов и аэрозолей не проводились. Это означает, что, невзирая на теоретическую осуществимость испытаний газов и аэрозолей с применением технологий на основе RhCE, настоящим стандартом такая возможность не предусмотрена. Перед испытанием смесей веществ, сложной для испытаний химической продукции (например, нестабильной) или такой химической продукции, которая не может быть с уверенностью отнесена к области применения настоящего стандарта, в каждом случае следует уточнять, являются ли результаты такого исследования научно обоснованными. Изучение данного вопроса не требуется, если необходимость испытаний соответствующей смеси веществ установлена действующими требованиями.

3.4 Исследуемая химическая продукция, которая поглощает свет в том же спектральном диапазоне, что и формазановый краситель (ФК) в естественном состоянии или после обработки, а также исследуемая химическая продукция, которая способна непосредственно восстанавливать витальный краситель ТК (до ФК), может препятствовать правильному определению жизнеспособности тканей и требует дополнительного использования контрольных проб для внесения соответствующих поправок в результаты. Вид контрольных проб может различаться в зависимости от характера помех, создаваемых исследуемой химической продукцией, и от применяемой в каждом случае методики количественного определения ФК (подробнее см. 7.2.7.2-7.2.7.8).

3.5 Результаты, полученные на этапе предварительной валидации [29]-[32] и последующей валидации [9], [11], [12], [14], [15] методов EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCE EIT, подтверждают возможность их реализации в лабораториях, не обладающих обширным опытом подобных работ, а также их высокую внутри- и межлабораторную воспроизводимость. Согласно результатам валидационных исследований ожидаемый уровень воспроизводимости, исходя из согласованности заключений в случае применения метода EpiOcular EIT и согласно данным, полученным для химической продукции 113 наименований, составляет 95% в пределах одной лаборатории и 93% в пределах нескольких лабораторий. Уровень воспроизводимости, исходя из согласованности прогнозных заключений в случае применения метода SkinEthic HCE EIT и согласно данным, полученным для химической продукции 120 наименований, составляет 92% в пределах одной лаборатории и 95% в пределах нескольких лабораторий. Уровень воспроизводимости, исходя из согласованности прогнозных заключений в случае применения метода LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и согласно данным, полученным для 30 наименований эталонной химической продукции, указанной в стандартах результативности [23], составляет 96% в пределах одной лаборатории и 87% в пределах нескольких лабораторий. Уровень воспроизводимости, исходя из согласованности прогнозных заключений в случае применения метода MCTT HCE EIT и согласно данным для 30 наименований эталонной химической продукции, перечисленной в стандартах результативности [23], составляет 93% в пределах одной лаборатории и 90% в пределах нескольких лабораторий.

3.6 Метод EpiOcular EIT может применяться для идентификации химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках системы СГС ООН [1]. В соответствии с данными, полученными при проведении валидационных исследований [9], метод EpiOcular EIT имеет общую точность на уровне 80% (для химической продукции 112 наименований), чувствительность на уровне 96% (для химической продукции 57 наименований), долю ложноотрицательных заключений на уровне 4% (для химической продукции 57 наименований), специфичность на уровне 63% (для химической продукции 55 наименований) и долю ложноположительных заключений на уровне 37% (для химической продукции 55 наименований) относительно результатов, полученных при классификации согласно СГС ООН [1], проведенной по данным испытаний на глазу кролика in vivo [2], [18]. Данные испытаний при применении метода EpiOcular EIT для 97 жидких составов агрохимического назначения подтверждают результативность метода для таких смесей, аналогичную полученной при его валидации [33]. По итогам контрольных испытаний на глазу кролика in vivo [2], [18] указанные 97 химических составов были классифицированы следующим образом: 21 - класс опасности 1, 19 - подкласс опасности 2A, 14 - подкласс опасности 2B и 43 - класс опасности отсутствует согласно СГС ООН [1]. Исходя из данной информации, полученная общая точность метода составляет 82% (для 97 составов), чувствительность - 91% (для 54 составов), доля ложноотрицательных заключений - 9% (для 54 составов), специфичность - 72% (для 43 составов), а доля ложноположительных заключений - 28% (для 43 составов) [33].

3.7 Метод SkinEthic HCE EIT может применяться для идентификации химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках системы СГС ООН [1]. В соответствии с данными, полученными при проведении валидационных исследований [11], [12], метод SkinEthic HCE EIT имеет общую точность на уровне 84% (для химической продукции 200 наименований), чувствительность на уровне 95% (для химической продукции 97 наименований), долю ложноотрицательных заключений на уровне 5% (для химической продукции 97 наименований), специфичность на уровне 72% (для химической продукции 103 наименований) и долю ложноположительных заключений на уровне 28% (для химической продукции 55 наименований) относительно результатов, полученных при классификации согласно СГС ООН [1], проведенной по данным испытаний на глазу кролика in vivo [2], [18].

3.8 Метод LabCyte CORNEA-MODEL EIT может применяться для идентификации химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках системы СГС ООН [1]. В соответствии с данными, полученными при проведении последующего валидационного исследования [14], метод LabCyte CORNEA-MODEL EIT удовлетворяет критериям воспроизводимости и воспроизводимой способности, предусмотренным стандартами результативности для методов настоящего стандарта [23]. Кроме того, следует отметить, что базой данных, включающей результаты испытаний химической продукции 139 наименований, располагает разработчик модели ткани.

3.9 Метод MCTT HCE EIT может применяться для идентификации химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках системы СГС ООН [1]. В соответствии с данными, полученными при проведении последующих валидационных исследований [15], метод MCTT HCE EIT удовлетворяет критериям воспроизводимости и воспроизводимой способности, предусмотренным стандартами результативности для методов настоящего стандарта [23]. Дополнительно были проведены испытания химической продукции 141 наименования [15], согласно которым метод MCTT HCE EIT имеет общую точность на уровне 86% (для химической продукции 141 наименования), чувствительность на уровне 99% (для химической продукции 80 наименований), долю ложноотрицательных заключений на уровне 1% (для химической продукции 80 наименований), специфичность на уровне 69% (для химической продукции 61 наименования) и долю ложноположительных заключений на уровне 31% (для химической продукции 61 наименования) относительно результатов, полученных при классификации согласно СГС ООН [1], проведенной по данным испытаний на глазу кролика in vivo [2], [18].

3.10 Доля ложноотрицательных заключений, полученных при применении этих методов испытаний с использованием RhCE для веществ или смесей, находится в пределах значения вариабельности, установленного для метода Дрейза in vivo и равного 12% [34]. Ложноотрицательные заключения при применении любого из методов испытаний с использованием RhCE для веществ или смесей в данных обстоятельствах не являются критическими, поскольку любая исследуемая химическая продукция, воздействие которой приводит к снижению жизнеспособности тканей до уровней, равных или меньших, чем установленные предельные значения (см. 7.2.9.1), должна подвергаться дальнейшим испытаниям с применением другого (их) метода (ов) in vitro либо испытываться на подопытных кроликах в зависимости от конкретных действующих нормативных требований и с учетом положений Руководящего документа по интегрированным подходам к испытаниям и оценке серьезного повреждения глаз и раздражения глаз [3]. Данные методы пригодны для испытаний всех видов химической продукции, для которой отрицательный результат испытаний должен свидетельствовать, что данная продукция не требует классификации по способности вызывать раздражение или серьезное повреждение глаз (класс опасности согласно СГС ООН отсутствует). Применение методов EpiOcular EIT, SkinEthic HCE EIT, LabCyte CORNEA-MODEL24 EIT и MCTT HCE EIT в рамках классификации, отличной от установленной СГС ООН, должно быть согласовано с соответствующими регулирующими органами.

3.11 Недостатком методов настоящего стандарта является то, что они не позволяют разделять химическую продукцию, оказывающую раздражающее воздействие (обратимые последствия для глаз), т.е. продукцию класса опасности 2, и химическую продукцию, вызывающую серьезные повреждения (необратимые последствия для глаз), т.е. продукцию класса опасности 1, а также продукцию с сильным (подкласс опасности 2A) и слабым (подкласс опасности 2B) раздражающим воздействием на глаза, как это предусмотрено СГС ООН [1]. В подобных случаях требуется проведение дальнейших испытаний с соблюдением требований Руководящего документа по интегрированным подходам к исследованиям и оценке серьезного повреждения и раздражения глаз [3].

3.12 Термин "исследуемая химическая продукция" в настоящем стандарте применяется для обозначения объекта испытания и не связан с возможностью применения метода RhCE для испытаний тех или иных веществ и/или их смесей.