ГОСТ 34722-2021 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Метод исследований помутнения и проницаемости роговицы крупного рогатого скота для определения химической продукции, вызывающей серьезное повреждение глаз, и химической продукции, не требующей классификации опасности как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз (с Поправками)

     3 Исходные положения

3.1 В основе требований настоящего стандарта используются пункты протокола исследований ICCVAM BCOP [8], [9], который изначально был разработан с учетом информации, содержащейся в протоколе, подготовленном Институтом по научным исследованиям in vitro (Institute for Vitro Sciences - IIVS), и протоколе INVITTOX 124 [10]. Последний из них - это протокол, использованный для организации предварительных валидационных исследований, которые проводились при финансовой поддержке Европейского союза в 1997-1998 гг. Оба упомянутых протокола базируются на методе исследования BCOP, применение которого было впервые описано Gautheron et al. [11].

3.2 Методы исследования BCOP с использованием денситометров OP-KIT и LLBO (далее - метод BCOP OP-KIT, метод BCOP LLBO) могут применяться для определения химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз в соответствии с классификацией, предусмотренной СГС ООН, т.е. химической продукции, которая в рамках этой классификации должна быть отнесена к классу опасности 1 [4]. При использовании для этой цели метод BCOP OP-KIT демонстрирует общую точность прогнозирования на уровне 79% (n=191), долю ложноположительных заключений - на уровне 25% ((n=126) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 14% (n=65) относительно результатов испытаний, полученных при тестировании на глазу кролика in vivo при проведении классификации в соответствии с СГС ООН [3] (см. приложение А, таблица А.1). При исключении из базы данных по валидации исследуемой химической продукции, принадлежащей к определенным классам (т.е. спиртов, кетонов), или продукции соответствующего агрегатного состояния (т.е. твердой продукции) метод BCOP в рамках СГС ООН демонстрирует общую точность прогнозирования на уровне 85% (n=131), долю ложноположительных заключений - на уровне 20% (n=81) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 8% (n=50) [3]. Метод BCOP LLBO обеспечивает общую точность прогнозирования на уровне 78% (n=145), долю ложноположительных заключений - на уровне 21% (n=89) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 24% (n=56) относительно результатов испытаний, полученных при тестировании на глазу кролика in vivo при проведении классификации в соответствии с СГС ООН [12] (см. приложение А, таблица А.3). Если исключить из базы данных по валидации исследуемую химическую продукцию, принадлежащую к определенным классам (т.е. спиртам, кетонам), или продукцию соответствующего агрегатного состояния (т.е. твердую продукцию), метод BCOP LLBO в рамках СГС ООН демонстрирует общую точность прогнозирования на уровне 85% (n=55), долю ложноположительных заключений - на уровне 17% (n=32) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 13% (n=23) [12]. Кроме того, при применении метода BCOP существует риск занижения оценки опасности для исследуемой химической продукции, воздействие которой приводит к менее тяжелым, но при этом устойчивым последствиям in vivo [13]. Потенциальным недостатком применения данного метода испытаний для определения химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз (класс опасности 1 согласно СГС ООН), является высокая доля ложноположительных заключений для спиртов и кетонов и высокая доля ложноотрицательных заключений для твердой продукции, как об этом свидетельствуют собранные ранее данные [1], [2], [3], [12]. Вместе с тем, поскольку метод BCOP может давать завышенную прогнозную оценку опасности не для всего множества спиртов и кетонов, для некоторых из них правильно определяется принадлежность к классу опасности 1 согласно СГС ООН, вопрос об исключении этих функциональных органических групп из области применения метода не рассматривается. Пользователь настоящего стандарта должен самостоятельно принимать решение о том, является ли для него вероятность переоценки опасности конкретных испытуемых спиртов или кетонов допустимой и приемлемой, или в этой ситуации будет оправдано продолжение исследований, позволяющее вынести окончательную оценку по совокупности полученных свидетельств. В отношении ложноотрицательных заключений для твердой продукции следует иметь в виду, что условия воздействия химической продукцией при проведении теста Дрейза на раздражение глаз in vivo могут в отдельных случаях быть охарактеризованы как нестабильные или экстремальные и явиться причиной неверного прогноза о ее действительной раздражающей способности [14]. С другой стороны, важно отметить, что ни одно из ложноотрицательных заключений, зафиксированных в базе данных по валидации ICCVAM [2], [3] или при оценочных исследованиях применения LLBO [12] при определении химической продукции, способной вызывать серьезные повреждения глаз (класс опасности 1 согласно СГС ООН), не послужило основанием для прогнозирования того, что для исследуемой химической продукции класс опасности согласно СГС ООН отсутствует. Кроме того, ложноотрицательные заключения при применении метода BCOP с учетом описанных выше обстоятельств сами по себе не играют критической роли, так как вся химическая продукция, для которой на основании имеющихся данных не представляется возможным подготовить прогноз в соответствии с требованиями СГС ООН, должна подвергаться дальнейшим исследованиям с применением других надлежащим образом валидированных методов in vitro либо, при отсутствии иного выбора, тестироваться на кроликах в зависимости от конкретных действующих нормативных требований и с использованием последовательной исследовательской стратегии, ориентированной на оценивание по совокупности полученных свидетельств. С учетом того факта, что отдельная химическая продукция, представляющая собой твердую продукцию, при использовании метода BCOP может быть корректно распознана как относящаяся к классу опасности 1 согласно СГС ООН, вопрос об исключении продукции в данном агрегатном состоянии из области применения метода настоящего стандарта также не рассматривается. Конечные пользователи, таким образом, могут применять данный метод для оценивания опасности любых видов химической продукции, при этом прогнозное заключение о принадлежности химической продукции к классу опасности 1 согласно СГС ООН может использоваться для классификации ее как относящейся к данному классу опасности согласно СГС ООН без проведения дальнейших испытаний. В то же время, как указывалось выше, к положительным результатам, получаемым для спиртов и кетонов, следует относиться с осторожностью, поскольку оценка их потенциальной опасности при тестировании на глазу кролика in vivo при проведении классификации в соответствии с СГС ООН может быть завышенной.

3.3 Метод BCOP также может применяться для определения химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках СГС ООН [4]. В этом случае метод BCOP OP-KIT демонстрирует общую точность прогнозирования на уровне 69% (n=196), долю ложноположительных заключений - на уровне 69% (n=89) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 0% (n=107) относительно результатов испытаний, полученных при тестировании на глазу кролика in vivo при проведении классификации в соответствии с СГС ООН [3] (см. приложение А, таблица А.2). Метод BCOP LLBO обеспечивает общую точность прогнозирования на уровне 83% (n=145), долю ложноположительных заключений - на уровне 45% (n=41) и долю ложноотрицательных заключений - на уровне 6% (n=104) относительно результатов испытаний, полученных при тестировании на глазу кролика in vivo при проведении классификации в соответствии с СГС ООН [12] (см. приложение А, таблица А.4). Доля ложноположительных заключений (in vivo класс опасности согласно СГС ООН отсутствует, см. 6.2) сравнительно высока, однако сами по себе они не играют критической роли, так как вся химическая продукция, для которой на основании имеющихся данных не представляется возможным подготовить прогноз, должна подвергаться дальнейшим исследованиям с применением других надлежащим образом валидированных методов in vitro либо, при отсутствии иного выбора, тестироваться на кроликах в зависимости от действующих нормативных требований и с использованием последовательной исследовательской стратегии, ориентированной на оценивание по совокупности полученных свидетельств. Применение метода BCOP не представляет сложности при исследованиях спиртов, кетонов и твердой продукции, если целью является определение химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз в рамках СГС ООН (класс опасности согласно СГС ООН отсутствует) [3], [12]. У исследователей есть возможность применять данный метод для оценивания опасности химической продукции любых видов; при этом полученный отрицательный результат (класс опасности согласно СГС ООН отсутствует) должен восприниматься как убедительное свидетельство отсутствия необходимости для включения их в классификацию (класс опасности согласно СГС ООН отсутствует). Поскольку методы BCOP OP-KIT и BCOP LLBO позволяют корректно определить лишь 31% и 55% химической продукции, не требующей классификации как вызывающей раздражение или серьезное повреждение глаз, данный метод не следует рассматривать в качестве приоритетного при реализации восходящего подхода [6], если помимо него для применения доступны другие валидированные и признанные методы in vitro, характеризующиеся не только сопоставимой высокой чувствительностью, но и более высокой специфичностью.

3.4 Для метода BCOP OP-KIT при определении непрозрачности базовый перечень для валидации включал 113 веществ и 100 смесей [2], [3], для метода BCOP LLBO - 145 веществ [12]. До настоящего времени метод BCOP LLBO для смесей не применялся, тем не менее приборы двух типов рассматриваются пригодными для исследований как веществ, так и их смесей.

3.5 Применение метода BCOP не рекомендуется для идентификации исследуемой химической продукции, которая должна классифицироваться как вызывающая раздражение глаз (класс опасности 2 или подкласс опасности 2A согласно СГС ООН) или как обладающая слабым раздражающим воздействием на глаза (подкласс опасности 2B согласно СГС ООН), ввиду значительного количества химической продукции класса опасности 1 согласно СГС ООН, которая была отнесена к более низкому классу опасности 2 (подклассам опасности 2A или 2B), а также химической продукции, для которой класс опасности согласно СГС ООН отсутствует, но отнесенной к более высокому классу опасности 2 (подклассам опасности 2A или 2B). В данном случае может быть оправданным проведение дальнейших исследований с применением другого подходящего метода. Установлено, что применение метода BCOP приводит к получению заниженной оценки при идентификации агрохимических составов, которые должны быть отнесены к классу опасности 1 согласно СГС ООН [15].

3.6 Образцы глаз и роговицы для испытаний могут поступать со скотобоен, от коммерческих поставщиков, из научно-исследовательских учреждений, а также из других источников. Все стороны обязаны соблюдать требования действующего законодательства, придерживаться положений соответствующих правил, методик и руководств, а также располагать необходимыми разрешениями. Применительно к исследовательским лабораториям это означает, что все операции с образцами глаз и роговицы крупного рогатого скота должны выполняться с соблюдением норм и требований, принятых в соответствующих лабораториях для работы с материалами животного происхождения, в том числе тканями и тканевыми жидкостями. Рекомендуется руководствоваться универсальными положениями о мерах безопасности, установленными для всех лабораторий [16].

3.7 В методе BCOP не учитываются повреждения конъюнктивы и радужной оболочки, в нем исследуются результаты воздействия на роговицу, которые являются главным основанием для классификации in vivo, проводимой в рамках СГС ООН. При этом дать оценку обратимости характера повреждений роговицы с помощью метода BCOP не представляется возможным. И хотя в последнее время с учетом опыта проведения испытаний на глазу кролика появились предложения, касающиеся потенциальной возможности использования данных о глубине наносимых первичных повреждений роговицы в качестве критерия для распознавания отдельных видов необратимых деструктивных последствий [17], реализовать эту возможность на практике можно лишь обладая дополнительной научной информацией для понимания того, каким образом развиваются необратимые последствия, напрямую не связанные с высоким уровнем первичных повреждений. Применение метода BCOP не позволяет также оценивать потенциальный уровень системной токсичности, связанной с воздействием на глаза.

3.8 Настоящий стандарт подлежит периодической актуализации с целью включения в него новой информации и данных. Например, добавление сведений из области гистологии может представлять потенциальный интерес для подготовки более развернутого описания характера повреждений роговицы. В соответствии с [18] пользователям метода настоящего стандарта должно быть рекомендовано сохранять образцы роговицы и получать из них гистологические образцы, которые впоследствии могут быть пригодны для формирования соответствующей базы данных и разработки критериев принятия решений, способствующих дальнейшему повышению точности метода.

3.9 Все лаборатории, которые впервые внедряют у себя метод настоящего стандарта, должны использовать установленный перечень химических веществ для проверки квалификации, приведенный в приложении Б. Лаборатории, использующие данные вещества, должны подтвердить свою техническую компетентность для проведения испытаний по методу BCOP, прежде чем начать представлять данные, полученные с помощью этого метода, для целей официальной классификации химической продукции по степени ее опасности.