ГОСТ 34105-2023 Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Серологические методы

     7 Методы серологической диагностики бруцеллеза

Сущность методов заключается в выявлении в сыворотке крови животных специфических антител к бруцеллезным антигенам.

Срок проведения серологических исследований составляет не более 14 календарных дней.

7.1 Метод флуоресцентной поляризации (МФП)

Сущность метода заключается в выявлении в образце сыворотки крови крупного рогатого скота антител к ОПС-антигену бруцелл, меченному ФИТЦ. При отсутствии антител показатель поляризации низкий, при их наличии и связывании с конъюгатом он увеличивается.

Для измерения степени поляризации света, меняющейся при взаимодействии конъюгата ОПС-антигена с антителами, используют анализатор флуоресцентной поляризации.

7.1.1 Подготовка к исследованию

Перед началом работы компоненты набора и анализируемые пробы сыворотки крови выдерживают в течение 30 мин при температуре от 18°С до 25°С.

Подготовка рабочего раствора разбавителя: к одной части разбавителя добавляют 24 части дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Рабочий раствор разбавителя не должен содержать взвешенных частиц, его хранят при комнатной температуре и используют в течение 1 мес.

Исследуемые образцы материала не должны содержать нерастворимых частиц, при наличии их удаляют центрифугированием при 3000 об./мин в течение 15-20 мин. Гемолизированные образцы пригодны для тестирования. Лиофилизированные образцы растворяют, замороженные - полностью размораживают и тщательно перемешивают.

7.1.2 Проведение исследования

В пробирки вносят по 0,02 см каждой исследуемой пробы сыворотки крови, положительного контроля и отрицательного контроля в трех повторах.

Затем во все пробирки вносят по 1 см рабочего раствора разбавителя, тщательно перемешивают и инкубируют 3-30 мин при комнатной температуре.

После этого учитывают фоновые значения поляризации всех исследуемых проб и контролей.

Далее во все пробирки вносят по 0,01 см конъюгата, тщательно перемешивают, инкубируют в течение 2-5 мин при комнатной температуре и определяют значения показателей поляризации.