ГОСТ Р ИСО 20776-1-2022

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ИССЛЕДОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИНФЕКЦИОННЫХ АГЕНТОВ И ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ИЗДЕЛИЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИМИКРОБНЫМ СРЕДСТВАМ

Часть 1

Референтный метод микроразведений в бульоне для лабораторного исследования активности антимикробных агентов по отношению к быстрорастущим аэробным бактериям, вызывающим инфекционные заболевания

Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices. Part 1. Broth microdilution reference method for laboratory testing of the activity of antimicrobial agents against rapidly growing infectious disease-causing aerobic bacteria

ОКС 11.100.20

Дата введения 2023-10-01

Предисловие

1 ПОДГОТОВЛЕН Ассоциацией специалистов и организаций лабораторной службы "Федерация лабораторной медицины" (Ассоциация "ФЛМ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 380 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы ин витро"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 ноября 2022 г. N 1266-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 20776-1:2019* "Определение чувствительности возбудителей инфекционных болезней к антимикробным препаратам и оценка функциональных характеристик изделий для ее определения. Часть 1. Референтный метод микроразведений в бульоне для исследования активности in vitro антимикробных препаратов в отношении быстрорастущих аэробных бактерий, вызывающих инфекционные болезни" (ISO 20776-1:2019 "Susceptibility testing of infectious agents and evaluation of performance of antimicrobial susceptibility test devices - Part 1: Broth microdilution reference method for testing the in vitro activity of antimicrobial agents against rapidly growing aerobic bacteria involved in infectious diseases", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан Техническим комитетом ТК 212 "Клинические лабораторные исследования и диагностические тест-системы in vitro" Международной организации по стандартизации (ИСО).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2012 (пункт 3.5).

Дополнительные сноски в тексте стандарта, выделенные курсивом, приведены для пояснения текста оригинала

5 ВЗАМЕН ГОСТ Р ИСО 20776-1-2010

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.rst.gov.ru)

Введение

Чувствительность к антимикробным препаратам in vitro определяют для микроорганизмов, которые являются предполагаемыми возбудителями заболевания, особенно если есть подозрение, что они принадлежат к виду, который мог бы проявлять резистентность (устойчивость) к часто используемым антимикробным препаратам. Данные испытания также важны для эпидемиологического наблюдения за антибиотикорезистентностью, эпидемиологических исследований чувствительности и сравнения новых и существующих антибактериальных препаратов.

Методы разведения используют для определения минимальной подавляющей концентрации (МПК) антимикробных препаратов с целью определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным средствам. Методы определения МПК используют для эпидемиологического наблюдения за антибиотикорезистентностью, выявления и определения фенотипов дикого типа, сравнительных исследований новых препаратов, определения чувствительности микроорганизмов, для которых рутинные исследования дают результаты, которые нельзя интерпретировать однозначно или которые могут быть ненадежными, а также в случаях, когда количественный результат требуется для клинического применения. Методами разведений проверяют способность микроорганизмов образовывать видимый рост в бульоне (или бульонной среде), содержащем последовательные разведения антимикробного препарата, или на ряде чашек с агаром (разведение в агаре).

Наименьшую концентрацию антимикробного препарата (выраженную в мг/л), которая при заданных условиях in vitro подавляет появление видимого роста микроорганизма в пределах заданного промежутка времени, называют минимальной подавляющей концентрацией (МПК). МПК служит руководством для клинициста относительно чувствительности организма к антибактериальному агенту и помогает в принятии решений о проведении лечения. Необходимы тщательный контроль и стандартизация внутри- и межлабораторной воспроизводимости, поскольку результаты могут значительно различаться в зависимости от используемого метода. Значения МПК для контрольных штаммов должны находиться в допустимом интервале значений (обычно два-три двукратных разведения); предпочтительнее, если они соответствуют целевому значению допустимого интервала.

Метод разведений в бульоне - метод, при котором контейнеры, содержащие равные объемы растворов бульона с антибактериальными средствами в возрастающих (обычно в геометрической прогрессии) концентрациях, инокулируют известным количеством микроорганизмов.

Методы последовательных (серийных) разведений - выполнение разведений в бульоне на планшетах для микроразведения.

Метод, описанный в настоящем стандарте, предназначен для определения чувствительности чистых культур аэробных бактерий, быстрорастущих на агаре в течение 12-18 ч инкубации и в бульоне Мюллера-Хинтон (объемом 200 мкл), модификация которого может потребоваться в зависимости от исследуемого антимикробного препарата.

Метод микроразведений в бульоне, описанный в настоящем стандарте, в общем и целом аналогичен методам, используемым во многих странах, и методу, приведенному в [1] и [2]. Данные методы основаны на принципах, описанных в [3].

ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЕ - Применение настоящего стандарта может быть связано с использованием опасных материалов, операций и оборудования. Настоящий стандарт не затрагивает решения проблем безопасности, связанных с его использованием. Пользователь настоящего стандарта несет ответственность за установление соответствующих мер безопасности, условий охраны здоровья и определение применимости регулирующих ограничений перед использованием стандарта.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает референтный метод микроразведения в бульоне для определения МПК. МПК отражает активность препарата в приведенных в настоящем стандарте условиях проведения теста и может быть использована клиницистами для целей лечения, принимая в расчет другие факторы, такие как фармакология препарата или механизмы резистентности бактерий. Это позволяет классифицировать бактерии как "чувствительные" (S), "умеренно резистентные" (I) и "резистентные" (R). Кроме того, распределения МПК могут использоваться для определения дикого или недикого типа бактериальной популяции. Несмотря на то, что клиническая интерпретация значения МПК не является предметом настоящего стандарта, для облегчения клинической интерпретации при исследовании некоторых комбинаций антимикробных препаратов и бактерий требуется модификация основного метода. Эти модификации приведены в приложении А. Чтобы гарантировать сопоставимость и достоверность результатов при использовании других методов исследования чувствительности как без применения приборов (например, диск-диффузионных), так и с использованием диагностических анализаторов, необходимо использовать для их валидации данный референтный метод.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте нормативные ссылки отсутствуют.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ИСО 15189, а также следующие термины с соответствующими определениями.

Терминологические базы данных ИСО и МЭК доступны по следующим интернет-адресам:

- платформа онлайн-просмотра ИСО по адресу: http://www.iso.org/obp;

- электропедия МЭК по адресу: http://www.electropedia.org/.

3.1 антимикробный препарат (antimicrobial agent): Вещество биологического, полусинтетического или синтетического происхождения, которое ингибирует рост бактерий или убивает их и таким образом может быть использовано для лечения инфекций.

Примечание 1 - Дезинфицирующие средства, антисептики и консерванты не включены в это определение.

3.2 активность (potency): Мера противомикробного действия препарата, выраженная в его количестве, необходимом для получения эффекта заданной интенсивности.

Примечание 1 - Активность выражают в виде массовой концентрации в миллиграммах на грамм, или в виде содержания активности в международных единицах (МЕ) на грамм, или в виде объемной или массовой доли в процентах, или в виде концентрации количества вещества (молярная доля) в молях на литр компонентов в тестируемом препарате.

3.3 концентрация (concentration): Количество антимикробного препарата в определенном объеме жидкости.

Примечание 1 - Концентрацию выражают в мг/л.

Примечание 2 - мг/л - единица, рекомендуемая ИСО.

3.4 базовый [основной] раствор (stock solution): Первоначальный раствор, используемый для дальнейших разведений.

3.5 минимальная подавляющая концентрация; МПК (minimum inhibitory concentration; MIC): Наименьшая концентрация, которая при определенных условиях in vitro предотвращает видимый рост бактерий в течение определенного промежутка времени.

Примечание 1 - МПК выражают в мг/л.

3.6 пограничное значение; ВР (breakpoint, ВР): Определенные значения параметров, например МПК, на основе которых бактерии могут быть отнесены по клиническим категориям к "чувствительным", "умеренно резистентным" и "резистентным".

Примечание 1 - Действующие пограничные значения для интерпретации результатов приведены в актуальных публикациях организаций, использующих данный референтный метод (таких, как CLSI и EUCAST).

3.7 дикий тип (wild type): Отсутствие приобретенных механизмов резистентности к антимикробному препарату у данного штамма.

3.8 референтный [контрольный] штамм (reference strain): Каталогизированные, охарактеризованные бактерии со стабильными определенными фенотипами и/или генотипами чувствительности к антимикробным препаратам.

Примечание 1 - Контрольные штаммы хранят в качестве исходных культур, из которых получают рабочие культуры. Их получают из признанных коллекций культур и можно использовать для контроля качества.

3.9 разведение в бульоне (broth dilution): Техника, при которой емкости заполняют соответствующими объемами раствора антимикробного препарата в возрастающих (обычно вдвое) концентрациях и соответствующими объемами бульона с определенным инокулюмом.

Примечание 1 - Цель данного метода - определение МПК.

3.10 микроразведение (microdilution): Выполнение разведения среды в планшетах для микроразведения вместимостью 200 мм (мкл) на лунку.

3.11 бульон (broth): Жидкая среда, используемая для роста бактерий in vitro.

Примечание 1 - Для выполнения референтного метода используют стандартный бульон Мюллера-Хинтон (см. приложение A).

3.12 инокулюм (посевной материал/инфекционный материал) (inoculum): Число бактерий в суспензии, рассчитанное относительно окончательного объема.

Примечание 1 - Инокулюм выражают в колониеобразующих единицах в миллилитре (КОЕ/мл).

3.13 инокулюм-эффект (inoculum effect): Изменение МПК, связанное с изменением концентрации инокулюма, выраженном в КОЕ/мл.

     4 Проведение исследования

4.1 Общие положения

Рабочие растворы распределяют в планшеты для микроразведения по 50 мкл на лунку с удвоенной предполагаемой окончательной концентрацией антимикробного препарата (и последующим добавлением бактериального инокулюма в объем 50 мкл в каждую лунку) или по 100 мкл на лунку с предполагаемой окончательной концентрацией антимикробного препарата (и последующим добавлением инокулюма в объеме не более 10 мкл). По крайней мере одна лунка, содержащая 50 мкл или 100 мкл питательной среды без антимикробного препарата, должна быть использована как контроль роста для каждого проверяемого штамма. Аналогично одна лунка, содержащая 100 мкл среды без антимикробного препарата, должна быть оставлена неинокулированной и использована для отрицательного контроля для каждого проверяемого штамма.

4.2 Питательная среда

Следует использовать бульон Мюллера-Хинтон (более подробное описание - см. приложения A и D).

4.3 Антимикробные препараты

4.3.1 Общие положения

Антимикробные препараты должны быть получены непосредственно от изготовителя или из надежных коммерческих источников*; использование лекарственных средств неприемлемо. Антимикробные препараты должны поставляться в виде порошка с указанием номера партии, активности, срока действия и подробным описанием рекомендованных условий хранения. Субстанции следует хранить в плотно закрытых контейнерах в темном месте с влагопоглотителем при рекомендованной изготовителем температуре. Гигроскопические препараты должны быть распределены на аликвоты, при каждом проведении исследования используют одну из них.

_________________

* В Российской Федерации в качестве антимикробных препаратов применяют зарегистрированные в установленном порядке медицинские изделия для диагностики ин витро.

Чтобы избежать конденсации, контейнеры перед вскрытием согревают до комнатной температуры.

4.3.2 Приготовление базовых (основных) растворов

Для взвешивания антимикробных препаратов следует использовать калиброванные аналитические весы. Количество действующей субстанции антимикробного препарата с учетом ее активности или объема разбавителя, необходимого для приготовления стандартного раствора, вычисляют по формулам: