ГОСТ Р ИСО 21474-1-2021 Медицинские изделия для диагностики in vitro. Мультиплексные молекулярные методы для определения содержания нуклеиновых кислот. Часть 1. Терминология и общие требования к оценке качества нуклеиновых кислот

Введение

В первом поколении таких медицинских изделий, как тесты для молекулярной диагностики, основанных на детекции нуклеотидных последовательностей, в качественном или количественном формате определяли единственную последовательность [например, вирусная РНК, матричная РНК (мРНК) или геномная ДНК (gДНК)] в биологическом образце. В мультиплексных молекулярно-биологических тестах в одной пробирке определяют сразу несколько нуклеотидных последовательностей, представляющих интерес. По мере развития технологий и выявления клинической значимости новых биомаркеров в клиническую практику активно разрабатывают и внедряют новые мультиплексные диагностические тесты.

Анализ клинических образцов по нескольким параметрам выполняют в несколько последовательных этапов или одновременно. Образцы собирают, транспортируют и хранят, после чего из них выделяют нуклеиновые кислоты с последующей очисткой или без нее. Затем измеряют количество нуклеиновых кислот и оценивают качество (при необходимости), разбавляют (при необходимости) и подвергают мультиплексным молекулярным тестам. В современной клинической практике мультиплексные тесты направлены на детекцию специфических ДНК- или РНК-мишеней с помощью мультиплексных ПЦР-исследований, микрочипов, а также методов, основанных на масс-спектрометрии или массивном параллельном секвенировании.

Существующие требования к качеству нуклеиновых кислот для молекулярного анализа с единственной мишенью (например, для моноплексной ПЦР [1], [2]) не всегда применимы к мультиплексным молекулярным тестам. Вследствие конкуренции за несколько нуклеотидных мишеней мультиплексные методы более чувствительны к качеству и количеству выделенных нуклеиновых кислот, чем методы с единственной мишенью. Разнообразие биологических, физических и химических свойств каждого образца на мультиплексный анализ будет влиять сильнее, чем на анализ с единственной мишенью. Это может привести к ненадежным результатам и затруднять ход лечения. Таким образом, к оценке качества образцов для мультиплексных молекулярных тестов следует подходить с особенным вниманием.

Сбор, транспортирование и подготовку образцов для медицинских лабораторий рассматривают в национальных и международных документах, в частности в ISO/TS 20658 "Лаборатории медицинские. Требования к отбору, транспортировке, получению и обработке образцов" [3], "Руководство по контролю качества образцов для молекулярных методов. Сбор, транспортировка и пробоподготовка образцов" (Япония, JCCLS) [4], "Руководство по контролю качества образцов для молекулярных методов (часть 2). Новые технологии и контроль качества образцов" (Япония, JCCLS) [5], и для конкретных типов биологических образцов - в серии международных стандартов ИСО 20166 [6], ИСО 20184 [7] и ИСО 20186[8].

Настоящий стандарт описывает терминологию и общие требования к качеству нуклеиновых кислот, используемых в мультиплексных молекулярных тестах, с целью обеспечения воспроизводимости результатов таких тестов.

Примечание - Методические указания, требования и критерии эффективности, изложенные в настоящем стандарте, призваны обеспечить получение сопоставимых, точных и воспроизводимых результатов в разных лабораториях.