ГОСТ Р 59786-2021/ISO/TS 16782:2016 Клинические лабораторные исследования. Критерии приемлемости партий дегидратированных агара и бульона Мюллера-Хинтон, применяемых для оценки чувствительности к антибиотикам

     4 Требования к бульону Мюллера-Хинтон

4.1 Компоненты бульона Мюллера-Хинтон

Среда бульона Мюллера-Хинтон для оценки чувствительности к антибиотикам традиционно содержит следующие примерные количества компонентов на дм (литр) очищенной воды (для соответствия критериям эффективности могут потребоваться корректировки) [7]:

- дегидратированный настой из 300 г говядины (то есть 2 г порошка экстракта говядины);

- кислотный гидролизат казеина - 17,5 г;

- крахмал - 1,5 г.

4.2 Физические и химические свойства

4.2.1 Дегидратированный порошок или гранулы

Цвет: от бежевого до светло-бежевого.

Однородный, сыпучий, гомогенный и не содержащий примесей.

4.2.2 Приготовление питательного бульона

После гидратирования рН, измеренный после автоклавирования, должен составлять 7,2-7,4 при температуре 25°С.

Жидкость светло-соломенного цвета, прозрачная, без видимых осадков.

4.2.3 Обогащение среды бульона Мюллера-Хинтон катионами и их содержание

Среда бульон Мюллера-Хинтон должна содержать концентрации двухвалентных катионов металлов, необходимые для обеспечения роста микроорганизмов, дающего возможность исследователю определить значения МПК (например, аминогликозидов и хинолонов) для контрольных штаммов, в пределах диапазонов, указанных в ИСО 20776-1:2006 (таблица 4) (необходимо проверить контрольные диапазоны в последних версиях CLSI и EUCAST). При производстве новых партий среды может возникнуть необходимость проведения определения содержания катионов. Производственные партии среды (бульон Мюллера-Хинтон), приготовленные из дегидратированного продукта, должны содержать не более 25 мг/дм (мг/л) общего кальция и 12,5 мг/дм (мг/л) общего магния. Производители могут отдать предпочтение в пользу производства партий среды с установленными концентрациями катионов или фактическими уровнями менее 20 мг/дм (мг/л) Ca и 10 мг/дм (мг/л) Mg. В последнем случае на маркировке указывают фактическое содержание катионов в партии бульона. При окончательном исследовании приготовленный бульон Мюллера-Хинтон должен содержать от 20 до 25 мг/дм (мг/л) Ca и от 10 до 12,5 мг/дм (мг/л) Mg.

Наряду с тем, что содержание марганца в следовых количествах необходимо для роста, концентрация ионов марганца не должна превышать 8 мг/дм (мг/л), чтобы избежать ложных интерпретаций резистентности к глицилциклинам [8]. Результат должен быть валидирован по значению МПК тигециклина, соответствующему допустимому диапазону, при исследовании контрольного штамма Escherichia coli WDCM 00013.

Так как для роста микроорганизмов необходимы следовые количества цинка, концентрация цинка должна быть ниже 3 мг/дм (мг/л), чтобы избежать ложных интерпретаций резистентности к имипенему [9] и, потенциально, к другим карбапенемам. Результат должен быть валидирован по значению МПК имипенема, соответствующему допустимому диапазону, при исследовании контрольного штамма Pseudomonas aeruginosa WDCM 00025.

Концентрации катионов кальция, магния, марганца и цинка следует определять с помощью масс-спектрометрии с индуктивно связанной плазмой (ИСП МС) или пламенной атомно-абсорбционной спектроскопии (ПААС) [10].

Так как иные ионы, влияющие на результаты определения чувствительности к другим антимикробным препаратам, не включены в настоящий стандарт, они должны учитываться производителями при определении чувствительности к антимикробным препаратам методом последовательных разведений в бульоне Мюллера-Хинтон. К задействованным антимикробным препаратам относятся даптомицин [11] и полимиксин [12]. При определении чувствительности к даптомицину бульон Мюллера-Хинтон должен быть дополнен Ca до концентрации 50 мг/дм (мг/л). Инструкции по приготовлению среды и определению чувствительности к антимикробным препаратам приведены в ИСО 20776-1.

4.2.4 Другие компоненты среды

Среда должна иметь массовую концентрацию тимидина менее 0,03 мг/дм (мг/л), для обеспечения получения валидного результата МПК триметоприма-сульфаметоксазола 0,5/9,5 мг/дм (мг/л) при исследовании контрольного штамма Enterococcus faecalis WDCM 00087 [13].

4.2.5 Специфические корректировки, выполняемые производителем

Для антимикробных препаратов, включенных в таблицу 1:

a) включение хлорида натрия (2% массы к объему NaCI) до концентрации 20 г/дм (г/л) в бульон необходимо для выявления устойчивости к метициллину у Staphylococcus spp. при исследовании с оксациллином;

b) при исследовании тигециклина методом микроразведений в бульоне для приготовления планшетов для определения МПК необходимо использовать среду, приготовленную в день использования. Среда должна быть приготовлена не ранее 12 ч до момента подготовки планшетов; тем не менее планшеты могут быть заморожены для последующего использования. Дополнительная информация приведена в ИСО 20776-1.

Производители могут выбрать для тестирования дополнительные антимикробные препараты и штаммы, а также среду Мюллера-Хинтон, обогащенную для роста прихотливых штаммов. Ожидаемые характеристики должны быть валидированы.

Для микроорганизмов, не включенных в таблицу 1 (например, для расширенного тестирования по усмотрению производителя):

c) исследование прихотливых микроорганизмов, таких как стрептококки и Haemophilus spp. требует добавления ростовых добавок (например, крови или компонентов крови). Если партию агара или бульона Мюллера-Хинтон, прошедшую валидацию в соответствии с критериями, приведенными в настоящем стандарте, используют для тестирования прихотливых микроорганизмов, то после добавления дополнительных компонентов полученные значения МПК или диаметры зон должны попадать в приемлемые диапазоны МПК, приведенные в ИСО 20776-1 для конкретной среды и тестируемого микроорганизма.

Влияние свойств среды на результаты определения чувствительности к отдельным антимикробным препаратам изложено в приложении A (таблицы А.1, А.2).