ГОСТ Р 59577-2021 Кожа, мех и изделия из них. Определение индекса токсичности

     7 Проведение испытаний

7.1 Для проведения испытаний используют водные экстракты (вытяжки) испытуемых образцов (опытный раствор), контрольные растворы, а также размороженную суспензионную кратковременную культуру клеток млекопитающих - сперму быков по ГОСТ 26030.

Приготовление растворов - в соответствии с 7.2-7.4.

7.2 Приготовление опытного раствора

7.2.1 Измельченную пробу образца массой (1,00±0,01) г помещают в колбу с притертой пробкой, заливают 100 см дистиллированной воды, тщательно перемешивают, добиваясь полного смачивания образца водой. При плохом смачивании измельченной пробы допускается применение утяжелителей нейтрального состава (например, пластиковых или стеклянных шариков).

Экстракцию проводят в суховоздушном термостате при температуре (40±2)°С в течение 1 ч.

7.2.2 Для приготовления опытного раствора в водный экстракт по 7.2.1 добавляют 0,4 г глюкозы и 0,1 г натрия лимоннокислого на 10 см раствора.

7.3 Приготовление контрольного раствора

В качестве контрольного раствора используют раствор, состоящий из 10 см дистиллированной воды, 0,4 г глюкозы, 0,1 г натрия лимоннокислого.

Контрольный раствор одновременно является разбавителем для оттаивания замороженной спермы.

7.4 Оттаивание замороженной спермы

7.4.1 Для оттаивания замороженной спермы в пробирку отбирают разбавитель в объеме, указанном в сопроводительных документах (паспорте) на сперму быка, и ставят ее в термостат анализатора изображения с температурой (40,0±1,5)°С.

7.4.2 Извлекают из сосуда Дьюара замороженную сперму и опускают ее в пробирку с нагретым до температуры (40,0±1,5)°С раствором, приготовленным по 7.4.1. Сразу после размораживания содержимое пробирки тщательно перемешивают до получения однородной суспензии, встряхивая пробирку и ставят обратно в термостат на 5-6 мин.

7.5 Проведение испытаний

Индекс токсичности определяют путем сравнения экспериментальных данных опытного раствора с контрольным.

7.5.1 Испытания проводят при температуре (40,0±1,5)°С.

По 0,4 см контрольного и опытного растворов переносят в пробирки с притертыми пробками и ставят в термостат анализатора изображения при температуре (40,0±1,5)°С.

7.5.2 В пробирки с контрольным и опытным растворами помещают по 0,1 см полученной по 7.4 суспензии сперматозоидов.

7.5.3 Заполняют по пять капилляров анализатора изображения контрольным и опытным растворами.

7.5.4 Капилляры устанавливают в каретку и помещают ее в анализатор изображений.

7.5.5 Нажатием кнопки "Старт" анализатора изображения начинают процесс испытаний (накопление экспериментальных данных).

Процесс испытаний, обработка результатов, вычисление индекса токсичности, коэффициента вариации и всех характеристик эксперимента выполняются автоматически анализатором изображений.

7.5.6 При подвижности сперматозоидов порядка 10% от первоначальной активности в опытных капиллярах останавливают процесс накопления экспериментальных данных нажатием кнопки "Стоп".

7.5.7 При получении значения коэффициента вариации величины интенсивности движений сперматозоидов более 15% эксперимент повторяют, начиная с 7.4.

Если значение коэффициента вариации не более 15%, то результаты испытаний считают статистически значимыми. Результаты испытаний оформляют протоколом.

Протокол испытаний должен содержать значение индекса токсичности с точностью до 0,1.