ГОСТ 32634-2020 Методы испытаний по воздействию химической продукции на организм человека. Разъедание кожи in vitro. Методы с использованием реконструированного человеческого эпидермиса

     4 Сущность метода испытаний

4.1 Исследуемая химическая продукция наносится местно на трехмерную модель реконструированного человеческого эпидермиса (RhE), состоящую из нетрансформированных эпидермальных кератиноцитов человека, выращенных таким образом, чтобы получить многослойную, высокодифференцированную копию естественного человеческого эпидермиса. В ней должны выделяться отчетливо выраженные базальный, шиповатый и зернистый слои, а также слоистый роговой слой (stratum corneum) с межклеточными ламеллярными липидными слоями, представляющими основные классы липидов, аналогичные тем, которые можно встретить in vivo.

4.2 Для целей испытаний с использованием модели RhE предполагается, что разъедающая кожу химическая продукция может проникать в роговой слой путем диффузии или эрозии, оказывая цитотоксическое действие на нижележащие слои клеток. Жизнеспособность клеток определяется на основе ферментативного преобразования витального красителя МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромид; тиазолиловый синий тетразолия бромид; CAS 298-93-1) в синеокрашенную соль формазана, количество которой измеряется после ее экстрагирования из тканей [27]. Разъедающая кожу химическая продукция выявляется по ее способности снижать жизнеспособность клеток ниже установленных пороговых значений (см. пункты 7.6.3, 7.6.4). Применение методов испытаний на разъедание кожи с использованием модели RhE подтвердило возможность прогнозировать с их помощью разъедающее действие на кожу, наблюдаемое при проведении экспериментов in vivo на кроликах в соответствии с OECD 404 [2].