ГОСТ 34556-2019 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Испытания по оценке кожной сенсибилизации методом изучения реакции региональных лимфатических узлов (с Поправкой)

     5 Сущность метода

5.1 Выбор вида животных

Для исследований используют молодых взрослых нерожавших и небеременных самок мышей линии СВА/Са или CBA/J. На момент начала эксперимента возраст животных должен быть от 8 до 12 нед с колебаниями массы тела ±20% от среднего значения. При необходимости можно использовать другие линии животных и самцов, если в результатах метода LLNA не существует линейных/гендерных различий.

5.2 Условия содержания и кормления

Мыши должны быть размещены по клеткам в соответствии с разделением на подопытные группы [23], если не представлено соответствующее научное обоснование для индивидуального размещения животных. Температура в помещении, предназначенном для экспериментов на животных, должна составлять (22±3)°С. Относительная влажность воздуха должна быть не менее 30% и не более 70% (допускается во время влажной уборки помещения), оптимальный диапазон влажности составляет от 50% до 60%. Освещение должно быть искусственным с чередованием 12 ч света и 12 ч темноты. Для кормления можно использовать стандартный лабораторный корм с неограниченным доступом к питьевой воде.

5.3 Подготовка животных

Животных отбирают случайным образом, маркируют для индивидуальной идентификации (любым способом, не затрагивающим область ушей) и содержат в клетках не менее пяти дней до начала введения исследуемого вещества, для того чтобы обеспечить их акклиматизацию к лабораторным условиям. До начала воздействия всех животных осматривают на предмет отсутствия видимых кожных повреждений.

5.4 Подготовка растворов

Перед нанесением на уши мышей твердые исследуемые вещества должны быть растворены или суспендированы в подходящих растворителях/носителях и при необходимости разбавлены. Жидкие исследуемые вещества могут быть нанесены в чистом виде или в виде рабочих растворов необходимых концентраций. Нерастворимые вещества, которые можно обнаружить в медицинских изделиях, следует подвергать тщательной экстракции подходящим растворителем для выделения всех экстрагируемых компонентов перед нанесением на уши мышей. Растворы исследуемых препаратов готовят ежедневно, за исключением тех веществ, стабильность которых допускает хранение растворов в течение определенного времени.

5.5 Проверка надежности

5.5.1 PC используют для демонстрации надлежащей эффективности проведения анализа. С этой целью используют вещества с хорошо известной способностью к кожной сенсибилизации, позволяющие убедиться в адекватных и воспроизводимых результатах исследований. PC включают в каждый проводимый эксперимент для демонстрации компетентности лаборатории и ее способности проводить исследования, а также для оценки внутри- и межлабораторной воспроизводимости и сопоставимости результатов испытаний. Некоторые контролирующие органы также требуют проведения PC для каждого исследования, и поэтому пользователям настоящего стандарта рекомендуется проводить консультации с соответствующими органами до выполнения LLNA. Постоянное использование параллельных PC позволяет избегать дополнительного испытания на животных, необходимого для устранения проблем, возникающих при периодическом использовании PC (см. 5.5.2). Положительный ответ LLNA, вызванный воздействием PC, приводит к увеличению SI>3 по сравнению с группой отрицательного контроля (NC). Выбранная доза PC не должна вызывать чрезмерной реакции воспаления кожи ушей или реакций системной токсичности; положительный эффект PC должен быть воспроизводимым, но не избыточным (то есть SI>20). В качестве PC, как правило, используют 25%-ный раствор гексилкоричного альдегида (CAS N 101-86-0) в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1 по объему) и 5%-ный раствор меркаптобензотиазола (CAS N 149-30-4) в N,N-диметилформамиде (см. таблицу А.1 приложения А). При достаточном обосновании можно использовать другие вещества, удовлетворяющие приведенным критериям.

5.5.2 Лабораториям, регулярно использующим метод LLNA (не реже одного раза в месяц), допускается применять PC периодически (один раз в полгода), например: лабораториям, имеющим достоверную базу экспериментальных данных с включением PC, демонстрирующую их компетентность относительно получения воспроизводимых и точных результатов (не менее 10 независимых испытаний с использованием PC, проводимых не реже одного раза в год, с получением согласованных положительных результатов).

5.5.3 Параллельная группа PC всегда должна быть включена при возникновении изменений в процедуре проведения LLNA, например: при замене обученного персонала, смене поставщиков материалов, реагентов и лабораторных животных, замене используемого оборудования, что обязательно должно быть зарегистрировано в отчете. Следует рассмотреть влияние этих изменений на адекватность ранее полученной экспериментальной базы данных и оценить необходимость формирования новой базы данных для обеспечения согласованности результатов ПК.