ГОСТ ISO/TR 10993-33-2018 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 33. Руководство по испытаниям на генотоксичность. Дополнение к ISO 10993-3 (Переиздание)

     6.4.1 Обработка тестируемым образцом

При методе внесения образца на чашку в варианте без системы метаболической активации смешивают 0,1 мл тестируемого образца, 0,1 мл свежей бактериальной культуры (содержащей по меньшей мере 10 жизнеспособных клеток) и 0,5 мл стерильного буфера с 2,0 мл агара. При анализе с системой метаболической активации смешивают 0,5 мл смеси с системой метаболической активации, содержащей адекватное количество постмитохондриальной фракции (в диапазоне от 5% до 10% объемного содержания в смеси метаболической активации) с агаром (2,0 мл) вместе с бактериями и исследуемым образцом/раствором. Содержимое каждой пробирки смешивают и выливают на поверхность чашки с минимальным агаром. Поверхность агара должна затвердеть перед инкубацией.

Для метода преинкубации тестируемый образец/раствор предварительно инкубируют с исследуемым штаммом (содержащим по меньшей мере 10 жизнеспособных клеток) и стерильным буфером или с системой метаболической активации (0,5 мл) в течение 20 мин или более при температуре 37°С до смешивания с агаром и выливают на поверхность чашки с минимальным агаром. Как правило, 0,1 мл тестируемого образца или экстракта, 0,1 мл бактерий и 0,5 мл смеси S9 или стерильного раствора буфера смешивают с 2,0 мл агара. Пробирки должны быть аэрированы во время предварительной инкубации с помощью аппарата для встряхивания. Для адекватной оценки вариации следует использовать для каждого уровня доз по три чашки. Применение двух чашек приемлемо при соответствующем научном обосновании. Случайная потеря чашки не обязательно делает опыт недействительным.

Газообразные или летучие вещества должны быть исследованы подходящими методами, например с использованием герметичных емкостей.

При необходимости проведения количественных сравнений между экспериментами при наличии и отсутствии смеси S9 исследования должны проводить в течение одного дня.

Для исследований in vitro с наличием дополнительных подтверждающих этапов, таких как многократное повторение длительного эксперимента или исследования с использованием экзогенной системы метаболической активации и без нее, дальнейшее подтверждающее исследование не проводят при получении четко положительных или отрицательных результатов. Неоднозначные результаты могут потребовать повторных экспериментов, возможно, с модифицированным протоколом, таким как подходящий выбор исследуемых концентраций.