ГОСТ ISO/TR 10993-33-2018 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 33. Руководство по испытаниям на генотоксичность. Дополнение к ISO 10993-3 (Переиздание)

     6.2.3 Метаболическая активация

Исследуемый образец должен воздействовать на бактерии как в присутствии, так и в отсутствие системы метаболической активации. Наиболее часто используемой системой является дополненная кофактором постмитохондриальная фракция S9, приготовленная из печени грызунов, обработанных фермент-индуцирующими агентами, такими как Ароклор 1254 или комбинация фенобарбитона и -нафтофлавона. Постмитохондриальную фракцию обычно используют при концентрациях в диапазоне от 5% до 10% объемной доли в смеси S9.

Поставщики и информация о контроле качества S9 (т.е. метод приготовления, линия грызунов, концентрация индуктора Р450 и т.д.) должны быть отражены документально. Если S9 получен непосредственно в лаборатории, то источник и метод подготовки должны быть отражены документально. Таким образом, активность S9 должна быть проверена при использовании двух эталонных промутагенов для определенного штамма (например, S. typhimurium TA100) и сравнена с историческим контролем.

Концентрация гомогената S9 должна быть выражена в единицах активности на чашку, так как разные поставщики могут изготовлять S9 по-разному, например: использовать разные кофакторы в смеси S9, разное соотношение ткани и гомогенизирующей жидкости во время приготовления S9.

Должны быть выбраны буфер и концентрации компонентов.

Простое исключение компонента смеси S9 в верхнем слое агара не рекомендуется в отсутствие системы метаболической активации, так как различающиеся объемы поверхностного агара изменят воспринимаемую дозу соединения (по крайней мере, изначально, в зависимости от растворимости и/или диффузии в базальный агар). Смесь S9 должна быть заменена подходящим буфером.