ГОСТ ISO/TR 10993-33-2018 Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Часть 33. Руководство по испытаниям на генотоксичность. Дополнение к ISO 10993-3 (Переиздание)
6.5.3 Критерии обоснованного исследования
Для того чтобы оценка мутагенности каждого исследуемого образца была признана валидизированной, необходимо соответствовать следующему критерию: все культуры стандартных штаммов Salmonella, рекомендуемые выше, должны продемонстрировать наличие специфических мутаций (rfa) и делеций в гене uvrB. Культуры стандартных штаммов ТА98 и ТА100 должны продемонстрировать наличие плазмидного R-фактора pKM101. Все культуры WP2 uvrA должны продемонстрировать чувствительность к ультрафиолету, вызванную мутацией uvrA. Все культуры должны продемонстрировать характерное среднее количество спонтанных ревертантов в бланках экстракции, например: ТА98 от 10 до 50; ТА100 от 80 до 240; ТА1535 от 5 до 45; ТА1537 от 3 до 21; WP2 uvrA от 10 до 60. Для того чтобы убедиться, что высеяно надлежащее количество бактерий, титры культуры стандартных штаммов должны быть выше или равняться 0,3·10 клеток/мл. Среднее значение количества ревертантов в каждом положительном контроле должно показывать значительное увеличение по сравнению со значением в соответствующем контроле растворителя и в диапазоне контроля, имеющимся в архиве данных лаборатории.
О токсичности судят по одному или двум критериям:
- снижение более 50% с дозовой зависимостью среднего количества ревертантов на чашку по сравнению со средним соответствующим контролем;
- по крайней мере, умеренное сокращение спонтанного фона (см. код 3, 4 или 5 в таблице 2).
Таблица 2 - Спонтанный фон для метода бактериальных мутаций
Код | Описание | Характеристики |
1 | Нормальный | Отличается здоровым газоном микроколоний |
2 | Слегка сокращенный | Отличается заметным прореживанием газона микроколоний и, возможно, небольшим повышением размера микроколоний по сравнению с бланком экстракции |
3 | Умеренно сокращенный | Отличается отчетливым прореживанием газона микроколоний, приводящим к выраженному повышению размера микроколоний по сравнению с бланком экстракции |
4 | Чрезвычайно сокращенный | Отличается сильным прореживанием газона микроколоний, приводящим к повышению размера микроколоний по сравнению с бланком экстракции, так что газон микроколоний виден невооруженным глазом как изолированные колонии |
5 | Отсутствующий | Отличается полным отсутствием газона микроколоний в 90% или более чашки |
6 | Затенен частицами | Фоновый газон бактерий не может быть точно оценен из-за микроскопических частиц исследуемого образца |
7 | Непрепятствующий преципитат | Отличается преципитатом в чашке, видным невооруженным глазом, но частицы преципитата, обнаруженные автоматизированным счетчиком колоний, составляют 10% или менее от количества ревертантных колоний (например, три или менее частиц в чашке с 30 ревертантами) |
8 | Препятствующий преципитат | Отличается преципитатом в чашке, видимым невооруженным глазом, но частицы преципитата, обнаруженные автоматизированным счетчиком колоний, составляют более 10% колоний ревертантов (например, более чем три частицы в чашке с 30 ревертантами) |
| ||
Наноматериал или наночастицы не включены в определение преципитатов и частиц.