ГОСТ 34409-2018 Продукция соковая. Определение L-яблочной кислоты ферментативным методом (с Поправкой)
9 Порядок проведения определений
9.1 Приготовление раствора пробы
Для обеспечения достоверности результатов измерений количество L-яблочной кислоты в кювете должно быть от 1 до 35 мкг для измерений при 365 нм (или от 0,5 до 20 мкг - для измерений при 334 и 340 нм). Для достижения этого условия пробу разбавляют водой в соответствии с требованиями, указанными в таблице 1 или в соответствии с инструкцией к набору реагентов.
Таблица 1
Ожидаемая массовая концентрация в пробе, г/дм | Разбавление водой | Фактор разбавления (F) | |||||||||||
340 нм или 334 нм | 365 нм | ||||||||||||
До 0,2 включ. | До 0,35 включ. | Не разбавляется | 1 | ||||||||||
Св. | 0,2 | " | 2,0 | " | Св. | 0,35 | " | 3,5 | " | 1+9 | 10 | ||
" | 2,0 | " | 20,0 | " | " | 3,5 | " | 35,0 | " | 1+99 | 100 | ||
" | 20,0 | " | 35,0 | 1+999 | 1000 | ||||||||
9.2 Если массовая концентрация L-яблочной кислоты в растворе пробы менее 2,5 мг/дм, то ее объем, вносимый в кювету, может быть увеличен до 1,00 см
. В этом случае следует снизить на соответствующую величину объем воды, добавляемой в кювету, для поддержания на постоянном уровне общего объема инкубационной смеси в кювете.
При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1,000) готовят новую пробу, увеличивая разбавление. Рекомендуется также уменьшить объем раствора пробы в кювете, компенсируя снижение общего объема в кювете увеличением объема воды.
При вычислении результатов массовой концентрации L-яблочной кислоты необходимо учесть измененный объем раствора пробы в формуле (2).
9.3 Ферментативная реакция и количественное определение L-яблочной кислоты
Проводят два параллельных определения в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-2 (подраздел 3.14).
В кювету вносят реактивы 1-4 (см. раздел 5), воду и раствор пробы, приготовленной по 9.1, в соответствии с требованиями, указанными в таблице 2 или в соответствии с инструкцией к набору реагентов.
Таблица 2 - Порядок добавления реагентов для проведения измерений
Наименование растворов, дозируемых в кювету, и последовательность их дозирования | Объем, вносимый в кюветы, см | |
Холостой раствор (контроль) | Раствор пробы | |
Реактив 1 | 1,00 | |
Реактив 2 | 0,20 | 0,20 |
Реактив 3 | 0,01 | 0,01 |
Раствор пробы (см. 9.1) | - | 0,10 |
Вода | 1,00 | 0,90 |
Шпателем перемешивают растворы в кюветах, через 3 мин проводят измерения оптических плотностей растворов ( | ||
Реактив 4 | 0,01 | |
Шпателем осторожно перемешивают содержимое кювет и через 5-10 мин проводят измерения оптических плотностей растворов ( | ||