ГОСТ 34133-2017 Мясо и мясные продукты. Метод определения аскорбиновой кислоты и аскорбатов высокоэффективной жидкостной хроматографией (Переиздание)

     9 Проведение измерений

9.1 Условия проведения измерений подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа и хроматографической колонки.

Проводят градуировку хроматографа с помощью градуировочных растворов, далее проводят измерения анализируемой пробы.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия хроматографического определения аскорбиновой кислоты и аскорбатов, выполненного на жидкостном хроматографе с хроматографической колонкой типа С18 4,6150 мм, 5 мкм:

Подвижная фаза: фосфатный буфер (pH=3,4 ед. pH), ацетонитрил, вода.

Перед введением пробы колонку кондиционируют 4 мин фосфатным буфером (pH=3,4 ед. pH) в соотношении с водой - 35:65 соответственно.

0,02 см анализируемой пробы вводят в подготовленный к работе жидкостный хроматограф и записывают хроматограмму в следующих условиях.

Градиентные условия элюирования: в течение 16 мин ацетонитрил от 0% до 30%, вода от 65% до 35%, фосфатный буфер (pH=3,4 ед. pH) - 35%.

Скорость подачи элюента 1,0 см/мин.

Температура колонки 30°С.

Длина волны детектирования - 245 нм.

Хроматограмма аскорбиновой кислоты с концентрацией 0,2 мг/см приведена в приложении А.

9.2 Идентификацию пиков хроматограммы анализируемой пробы проводят сравнением с хроматограммой градуировочного раствора по двум параметрам: времени удерживания и спектральному отношению R (отношение высот хроматографического пика на разных длинах волн 210 и 245 нм).

9.3 Если время удерживания и спектральные отношения пиков хроматограммы анализируемой пробы совпадают в пределах допускаемых отклонений (0,05, 3%) с временем удерживания и спектральными отношениями соответствующих им пиков хроматограммы градуировочного раствора, результат идентификации считают положительным.

9.4 Если спектральные отношения совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница времени удерживания пиков хроматограммы анализируемой пробы и хроматограммы градуировочного раствора больше допускаемого отклонения, проводят хроматографический анализ соответствующего градуировочного раствора по 8.1 и сравнивают время удерживания. В случае совпадения в дальнейшем в качестве образца используют новую хроматограмму.

В случае повторного несовпадения времени удерживания используют метод добавок, для чего к анализируемой пробе добавляют известные количества определяемой аскорбиновой кислоты с концентрацией, сравнимой с концентрацией "сомнительных" пиков, и анализируют по 9.1.

Если на хроматограмме пробы с добавкой площади "сомнительных" пиков увеличились на величину, соответствующую величине добавки, эти пики относятся к определяемым компонентам.

Если на хроматограмме пробы с добавкой наряду с "сомнительными" пиками присутствуют пики, время удерживания и спектральные отношения которых совпадают с соответствующими параметрами добавленных веществ, сомнительные пики не относятся к определяемым компонентам.

9.5 Если время удерживания соответствующих пиков хроматограммы анализируемого раствора и хроматограммы градуировочного раствора совпадают в пределах допускаемого отклонения, а разница спектральных отношений больше допускаемого отклонения, не допускается использовать результаты анализа данной пробы.

9.6 Концентрация аскорбиновой кислоты и аскорбатов в анализируемой пробе не должна превышать предельных значений концентраций градуировочных растворов. В случае превышения анализируемую пробу, содержащую аскорбиновую кислоту и аскорбаты, с помощью механического дозатора разбавляют дистиллированной водой в рассчитанное количество раз и проводят хроматографический анализ разбавленных растворов. Если массовая концентрация аскорбиновой кислоты и аскорбатов в анализируемой пробе ниже предельного значения градуировочного раствора, необходимо увеличить массу пробы.