ГОСТ 34138-2017 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания макроциклических лактонов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием (с Поправкой)

     8 Порядок выполнения анализа

8.1 Условия хроматографического разделения

8.1.1 Высокоэффективный жидкостный хроматограф с флуоресцентным детектором включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, указанные ниже.

8.1.2 Например, для колонки диаметром 3,9 мм, длиной 150 мм, с обращенно-фазным сорбентом С18 с размером частиц 4,0 мкм, соблюдают следующие условия хроматографирования:

- температура колонки - 30°С;

- скорость потока подвижной фазы - 0,6 см/мин;

- объем вводимой пробы - 20 мм.

Детекцию осуществляют на флуоресцентном детекторе при длинах волн возбуждения 365 нм и эмиссии 455 нм. Разделение проводят в изократическом режиме элюирования (приготовление подвижной фазы по 6.2.1) в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2 - Времена удерживания макроциклических лактонов

Примечание - Приведенные выше параметры хроматографического разделения могут отличаться в зависимости от используемого оборудования.

Пример хроматографического разделения макроциклических лактонов приведен в приложении А.

8.2 Построение градуировочной характеристики

Градуировочные характеристики строят заново в каждой серии анализов. Построение и расчет градуировочной характеристики проводят с помощью программного обеспечения.

8.2.1 Проводят однократное измерение градуировочных растворов, приготовленных по 6.3.3, в порядке возрастания их концентраций в условиях по 8.1.

8.2.2 Градуировочную характеристику строят в координатах "Площадь пика определяемого вещества в градуировочном растворе" - "Массовая концентрация определяемого вещества в градуировочном растворе". При построении градуировочной зависимости используют линейную регрессию вида , при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,99.

8.2.3 Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки по площади пика идентифицированного макроциклического лактона относительно градуировочной зависимости, полученной при анализе градуировочных растворов в аналогичных условиях.

8.2.4 Построение линейного градуировочного графика и расчет концентраций макроциклических лактонов в анализируемых пробах выполняется системой обработки данных в автоматическом режиме.

8.3 Измерение методом ВЭЖХ

8.3.1 Для определения содержания макроциклических лактонов проводят измерение методом ВЭЖХ в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации применяемого оборудования.

8.3.2 Измерение методом ВЭЖХ выполняют в виде последовательности однократных измерений, включающей следующие образцы:

- "чистую" пробу;

- градуировочные растворы (см. 6.3.3);

- экстракты анализируемых проб, приготовленных по 7.2.

8.3.3 Определяют и регистрируют на хроматограмме время удерживания пика каждого соединения, соответствующее времени удерживания, найденному при измерении градуировочных растворов по 8.1.2.