6.1 Подготовка посуды и материалов - по ГОСТ 32901.
6.2 Приготовление питательных сред
6.2.1 Приготовление стерильного обезжиренного молока
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко разливают в пробирки по 10 см и затем стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.
Стерильное обезжиренное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.2 Приготовление гидролизованного молока
Натуральное или восстановленное обезжиренное молоко кипятят или обрабатывают текучим паром в течение 20 мин, охлаждают до температуры (45±1)°С и устанавливают активную кислотность рН (7,6-7,8). К 1000 см молока добавляют (0,5-1,0) г порошка панкреатина и 5 см хлороформа. Колбу со смесью закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате при температуре 40°С в течение (18-24) ч. В течение первых (3-5) ч молоко несколько раз перемешивают (пробку после встряхивания приоткрывают для удаления паров хлороформа). Через (18-24) ч колбу вынимают из термостата, гидролизованное молоко фильтруют через бумажный фильтр, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1, устанавливают активную кислотность рН (7,0-7,2) и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (15±1) мин.
Гидролизованное молоко допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.3 Приготовление агара с гидролизованным молоком или бульоном
К 1000 см гидролизованного молока (6.2.2) или гидролизованного бульона (6.2.3.1) добавляют 15 г агара. Смесь нагревают до полного расплавления агара, фильтруют через вату и разливают в пробирки или колбы. Смесь стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (10±1) мин.
Агар с гидролизованным молоком допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.3.1 Приготовление гидролизованного бульона
Состав:
- сухой гидролизат белков молока | - 31 г; | |||
- сухой дрожжевой автолизат | - 2,5 г; | |||
- фосфат калия двузамещенный | - 1,5 г; | |||
- дистиллированная вода | - 1000 см. |
Все компоненты вносят в колбу, перемешивают и нагревают до полного растворения. Смесь охлаждают до температуры (50±2)°С и устанавливают рН (7,3±0,1) при температуре 25°С. Готовый гидролизованный бульон разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1)°С в течение (15±1) мин.
При использовании готового гидролизованного бульона (35±1) г сухой среды вносят в (1000±50) см холодной воды. Смесь тщательно перемешивают, кипятят (3-5) мин, не допуская пригорания. При наличии осадка фильтруют через ватно-марлевый фильтр. В полученной среде проверяют активную кислотность и корректируют рН до (7,3±0,1). При необходимости среду вновь подогревают, разливают в колбы или пробирки, закрывают ватными пробками и стерилизуют при температуре (121±2)°С в течение (15±1) мин.
Гидролизованный бульон допускается хранить при температуре (4±2)°С в течение 30 дней.
6.2.4 Приготовление среды для определения лактококков и термофильных стрептококков
Состав: