ГОСТ ISO 13366-2-2014 Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 2. Руководство по работе флуорооптоэлектронных счетчиков (Издание с Поправкой)

     4 Сущность метода

Флуорооптоэлектронные счетчики имеют системы ввода реагентов и пробы для анализа, секцию смешивания и секцию подсчета. В секции смешивания анализируемую пробу смешивают с буферной смесью и окрашивающим раствором. Часть полученной смеси перемещают в секцию подсчета и наносят на предметную плоскость. Каждая окрашенная частица, обнаруживаемая в флуоресцентном микроскопе, испускает электрический импульс, который фильтруется, усиливается и регистрируется. Распределение по высоте результирующего импульса обрабатывается электронным способом, посредством чего происходит разграничение между шумовыми сигналами и импульсами, которые испускаются окрашенными соматическими клетками. Уровень амплитудного селектора импульсов может быть фиксированным или динамичным.

В секции смешивания дозируют и смешивают строго контролируемые объемы пробы для анализа и буферного/окрашивающих растворов. Смешивание можно осуществлять в чашке, в смесительной камере, в центрифуге, в петле для образцов или в трубке, ведущей к проточной кювете.

В секции подсчета можно использовать дисковую или проточную цитометрию. В случае применения дисковой цитометрии тонкую пленку смеси наносят через насадку на верхнюю часть вертикально вращающегося диска. Эта вращающаяся поверхность служит подвижной предметной плоскостью флуоресцентного микроскопа. При использовании проточной цитометрии часть смеси помещают в высокоскоростной поток окружающей корпус жидкости в капиллярной проточной кювете. В результате ускорения смесь образует тонкую струю, в которой динамически фокусируются и выравниваются в линию соматические клетки. Эта струя проходит перед объективом флуоресцентного микроскопа.

В некоторых приборах в секции подсчета содержится два канала. Исходя из обеспечения аналитического качества, такая ситуация считается эквивалентной работе с двумя отдельными модулями, таким образом, что рабочие характеристики оцениваются отдельно для каждого канала.