ГОСТ ISO 22160-2015 Молоко и молочные напитки. Определение активности щелочной фосфатазы. Метод с применением фотоактивной ферментной системы (EPAS)

     8 Проведение испытания (см. приложение А)

8.1 Градуировка

8.1.1 Строят градуировочную кривую для каждого типа продукта, который будут испытывать. Начинают с установки фона люминометра (Bg) на 100 и коррекции (Cr) на 100.

При осуществлении настроек применяют руководство по эксплуатации люминометра. Градуировочные кривые являются стабильными, и их следует запускать, если используют новые партии/номера партий субстрата эфира диоксетана (4.1) и останавливающий раствор (4.2). Графическое представление для градуировки приведено в приложении А.

Примечание - Режим градуировки, согласно некоторым руководствам по эксплуатации люминометра, представлен с применением этапов по 8.1.1-8.2.2 (меню градуировки представляет собой пункт 8 в главном меню). Выбирают градуировку щелочной фосфатазы. Выбирают канал для градуировки. Выбирают градуировку. Выбирают для градуировки рабочую часть пробы, например молоко, сливки или шоколад (ароматизированный молочный продукт) или другое. Люминометр подсказывает пользователю следующие этапы.

8.1.2 При испытании используют три пробирки с градуировочными пробами. Используют пипетку с фиксированным объемом (5.3), снабженную наконечником для внесения 100 мкл субстрата эфира диоксетана (4.1) на дно трех мини-пробирок (5.2).

8.1.3 Для рабочих частей проб, полученных по 7.1.2-7.1.4, пипеткой с фиксированным объемом (5.3) и чистым наконечником добавляют 100 мкл отрицательной пробы для испытания (7.2) в каждую пробирку. Содержимое пробы помещают на дно пробирки, чтобы обеспечить контакт всей пробы с субстратом. Содержимое пробирок смешивают, поместив их в штатив, возвратно-поступательными движениями примерно 10 раз в течение 5 с.

8.1.4 Мини-пробирки (8.1.3) помещают на 3 мин в блок инкубатора (5.7), установленного на температуру 35°С. В конце инкубации к содержимому всех мини-пробирок с помощью дозатора с фиксированным объемом (5.4) в течение 15 с добавляют 1,0 мл останавливающего раствора (4.2).

8.1.5 Мини-пробирки вынимают из инкубатора. Каждую пробирку накрывают колпачком и энергично встряхивают в течение 5 с. Если необходимо, отвинчивают колпачок и крепят пробирку к адаптеру люминометра. Пробирку вставляют в люминометр. При завершении подсчета (звуковой сигнал) показания люминометра (5.1) считывают и записывают. Повторяют с каждой пробиркой. Чтобы избежать загрязнения следующей пробирки, к жидким растворам с адаптером не прикасаются. Если раствор контактирует с пробиркой, ее промывают водой и сушат перед повторным использованием. Рассчитывают среднее отрицательное значение (N). Определение, описанное в 8.1.2-8.1.5, повторяют, если одно любое значение более чем на 30% отличается от среднего значения.