ГОСТ ISO 17372-2016 Корма для животных. Определение содержания зеараленона методами иммуноаффинной колоночной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии (Переиздание)
4 Реактивы
Используют реактивы только признанной аналитической чистоты, если не указано иначе.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Работы со всеми реактивами проводят в вытяжном шкафу. Используют защитные очки и защитную одежду, избегая контакта реактивов с кожей.
4.1 Вода 1-й степени чистоты по ISO 3696.
4.2 Ацетонитрил (CHCN) для ВЭЖХ.
4.3 Метанол (CHOH) для ВЭЖХ.
4.4 Хлористый натрий (NaCI) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.5 Экстрагирующий растворитель объемной долей ацетонитрила (CH
CN)=90%.
Смешивают 900 см ацетонитрила (4.2) с 100 см
воды (4.1). Тщательно перемешивают.
4.6 Разбавленный ацетонитрил объемной долей (CH
CN)=50%.
Смешивают один объем ацетонитрила (4.2) с одним объемом воды (4.1). Хорошо перемешивают. Раствор используется в случае применения автосамплера.
4.7 Разбавленный метанол объемной долей (CH
OH)=30%.
Смешивают 75 см метанола (4.3) с 175 см
воды (4.1). Тщательно перемешивают.
4.8 Двузамещенный фосфорнокислый натрий (NaHPO
) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.9 Однозамещенный фосфорнокислый калий (KHPO
) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.10 Хлористый калий (KCI) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.11 Гидроксид натрия (NaOH) массовой долей основного вещества не менее 99%.
4.12 Солевой фосфатный буфер (ФСБ)
Растворяют в 1 дм воды (4.1) 8 г хлористого натрия (4.4), 1,16 г двузамещенного фосфорнокислого натрия (4.8), 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.9) и 0,2 г хлористого калия (4.10). Устанавливают значение рН 7,4 ед. рН с помощью раствора гидроксида натрия (4.13). Допускается использование готового концентрированного ФБС, разбавленного перед использованием.
4.13 Раствор гидроксида натрия, с (NaOH)=0,2 моль/дм
Растворяют 8 г гидроксида натрия (4.11) в 1 дм воды.
4.14 Подвижная фаза для ВЭЖХ
Помещают 460 см ацетонитрила (4.2) в колбу вместимостью 1 дм
, добавляют 460 см
воды (4.1) и 80 см
метанола (4.3). Тщательно перемешивают и фильтруют через фильтр (5.13).
4.15 Основной стандартный раствор зеараленона с номинальным значением массовой концентрации 50 мкг/см
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Зеараленон - микотоксин, обладающий эстрогенным действием. При обращении с ним следует учитывать его биологическую активность.
Взвешивают 5,0 мг зеараленона с точностью ±0,1 мг. Помещают в мерную колбу вместимостью 100 см (5.1.2). Растворяют в ацетонитриле (4.2) и доводят раствор до метки этим же растворителем.
Фактическое значение массовой концентрации зеараленона в основном стандартном растворе определяют следующим образом.
Отбирают пипеткой (5.1.3) 4,0 см основного стандартного раствора зеараленона, переносят в мерную колбу вместимостью 25 см
(5.1.2), доводят до метки ацетонитрилом (номинальное значение массовой концентрации зеараленона в полученном растворе 8 мкг/см
).
Измеряют оптическую плотность в ультрафиолетовой (УФ) области при длине волны 274 нм, используя кварцевую кювету с длиной оптического пути 10 мм. Определяют концентрацию зеараленона (C
H
O
), в мг/см
, по формуле
(C
H
O
)=
,