ГОСТ ISO 15141-2-2013 Продукты пищевые. Определение содержания охратоксина А в зерне и зерновых продуктах. Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с очисткой бикарбонатом

     4 Реактивы

При проведении испытаний используют только реактивы общепризнанного аналитического класса, дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. Растворитель должен иметь степень чистоты, необходимую для проведения анализа методом ВЭЖХ.

4.1 Хлороформ, стабилизированный 2-метил-2-бутеном или этанолом.

4.2 Фосфорная кислота, с (HPO)=0,1 моль/дм.

4.3 Диатомовая земля

900 г диатомовой земли, обработанной кислотой, на всю ночь помещают в метанол (см. 4.7). Фильтруют через двойной слой бумаги в воронку Бюхнера (см. 5.6), промывают 8 дм воды и сушат в течение 12 ч при температуре 150°С.

4.4 Раствор бикарбоната натрия, с (NaHCO)=30 г/дм.

4.5 Этилацетат

4.6 Толуол

4.7 Метанол

4.8 Ледяная уксусная кислота (CHCOOH)=98%

4.9 Ацетонитрил

4.10 Дихлорметан

4.11 Раствор для элюирования: смешивают в объемном отношении 95:5:0,5 этилацетат (см. 4.5), метанол (см. 4.7) и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8).

4.12 Подвижная фаза: смешивают ацетонитрил (см. 4.9), воду и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8) в объемном соотношении 99:99:2 и дегазируют.

4.13 Смесь растворителей: смешивают толуол (см. 4.6) и ледяную уксусную кислоту (см. 4.8) в объемном соотношении 99:1.

4.14 Трифторид бора

4.15 Трифторид бора, раствор в метаноле, с (BF)=14 г/см

Примечание - Испытания проводят в вытяжном шкафу, избегая контакта с кожей, глазами и дыхательными путями.

4.16 Охратоксин А, кристаллический и в жидком виде

4.17 Охратоксин А, основной раствор

Растворяют 1 мг охратоксина А (кристаллы) (см. 4.16) или содержимое 1 ампулы (в жидком виде) в смеси растворителей (см. 4.13) для получения раствора, содержащего от 20 до 30 мкг/см охратоксина А.

Для определения точной концентрации регистрируют спектр поглощения между длиной волны 300 нм и 370 нм с шагом в 5 нм в кварцевой кювете с толщиной слоя 1 см (см. 5.4) относительно смеси растворителей. Определяют длину волны в максимуме поглощения, регистрируя спектр вблизи него с шагом в 1 нм.

Массовую концентрацию охратоксина А, , в мг/см вычисляют по формуле

,                                                      (1)

где - оптическая плотность в максимуме поглощения (при 333 нм);

- относительная молекулярная масса охратоксина А (=403 г/моль);

- относительный молярный коэффициент поглощения охратоксина А в смеси растворителей (544 м/моль);

- толщина поглощающего слоя кварцевой кюветы, см.