ГОСТ 33835-2016 Продукция соковая. Метод определения лимонной кислоты (Издание с Поправкой)

     8 Проведение определения

8.1 Определение проводят при температуре от 20°С до 25°С и относительной влажности 50%-55%. Если обеспечивается достижение результатов, эквивалентных указанному выше температурному интервалу, допускается определение при постоянной выбранной температуре в интервале от 25°С до 37°С. Для дозирования определяемой пробы и растворов используют пипетки с делениями или пипеточные дозаторы. Растворы ферментов, коферментов и буфера вносят в кюветы соответствующими пипеточными дозаторами.

При использовании спектрофотометра с изменяемой длиной волны, измерения проводят только при длине волны 340 нм, при которой восстановленная форма НАДН показывает максимальный уровень поглощения. При использовании ртутной лампы проводят измерение спектра при длине волны 334 или 365 нм.

Пробы анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1-2003* (подраздел 3.14).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

8.2 В кювету спектрофотометра (фотометра) вносят 1,00 см буферного раствора 7,8 ед. рН, 0,1 см раствора НАДН, 0,20 см раствора анализируемой пробы, 1,80 см дистиллированной воды и 0,02 см смеси ферментов МДГ/ЛДГ. Инкубационную смесь перемешивают, выдерживают в течение 5 мин и измеряют в спектрофотометре (фотометре) начальную оптическую плотность раствора относительно воздуха.

При высоких значениях начальной оптической плотности (более 1,000) готовят новую пробу, используя 0,05 см раствора НАДН. В этом случае рекомендуется также уменьшить объем раствора анализируемой пробы в кювете, компенсируя снижение общего объема в кювете увеличением объема дистиллированной воды.

Если массовая концентрация лимонной кислоты в растворе анализируемой пробы менее 0,00002 г/см, то ее объем, вносимый в кювету, может быть увеличен до 2,00 см. В этом случае следует снизить на соответствующее значение объем дистиллированной воды, добавляемой в кювету, для поддержания на постоянном уровне общего объема инкубационной смеси в кювете.

При вычислении результатов необходимо учесть измененный объем раствора определяемой пробы в формуле (5).

8.3 К подготовленному в кювете по 8.2 раствору добавляют 0,02 см раствора ЦЛ. Содержимое кюветы перемешивают. Через 5-10 мин измеряют оптическую плотность раствора. Окончание реакции проверяют путем повторного считывания показаний спектрофотометра через 2 мин. Реакция считается завершенной при максимальном отклонении результата повторного считывания показаний спектрофотометра с результатом измерения оптической плотности в пределах ±0,002 единиц оптической плотности. Если данное условие не выполняется, то определение повторяют по 8.1.

8.4 Контрольное определение

В кювету вносят 1,00 см буферного раствора 7,8 ед. рН, 0,1 см раствора НАДН, 2,00 см воды и 0,02 см суспензии ферментов МДГ/ЛДГ, содержимое перемешивают. Через 5 мин измеряют начальную оптическую плотность раствора .

К подготовленному в кювете раствору добавляют 0,02 см ЦЛ, перемешивают, выдерживают в течение 5-10 мин и измеряют оптическую плотность .