ГОСТ EN 12823-2-2014 Продукты пищевые. Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Часть 2. Измерение содержания бета-каротина (Переиздание)

     4 Реактивы

Для испытаний используют реактивы гарантированной чистоты и воду не ниже 1-й степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696.

4.1 Метанол.

4.2 Этанол абсолютный, объемной долей 100%.

4.3 Этанол, объемной долей 96%.

4.4 Сульфат натрия (сернокислый натрий) безводный.

4.5 Растворы гидроксида калия (KOH) для омыления с соответствующими массовыми концентрациями, например: KOH = 50 г/100 см или 60 г/100 см, или спиртовые растворы, например: 28 г KOH в 100 см смеси этанол/вода (в объемном соотношении 9:1).

4.6 Антиоксиданты: аскорбиновая кислота (АК), аскорбат натрия, сульфид натрия (), бутилгидрокситолуол, пирогаллол или гидрохинон.

4.7 Растворители и экстрагенты: ацетонитрил, диэтиловый эфир (без пероксидов), диизопропиловый эфир, петролейный эфир (кипящий при температуре от 40°С до 60°С), н-гексан, дихлорметан, тетрагидрофуран, толуол или их смеси.

4.8 Раствор ацетата аммония в метаноле, например, c()=0,05 моль/дм.

4.9 Триэтиламин.

4.10 Растворители, выполняющие роль подвижной фазы в ВЭЖХ, например, смесь ацетонитрил (см. 4.7) - метанольный раствор ацетата аммония (см. 4.8) - дихлорметан (см. 4.7) (75:20:5 в объемном соотношении), содержащий 0,1% (по массе) бутилгидрокситолуола (см. 4.6) и 0,05% (по массе) триэтиламина (см. 4.9). Информация о подвижных фазах для альтернативных систем ВЭЖХ приведена в приложении С.

4.11 Образцы сравнения

4.11.1 Общие положения

Чистота образцов сравнения -каротина и -каротина варьируется между 90% и 100%. Поэтому необходимо определить массовую концентрацию градуировочного раствора спектрофотометрическим методом (см. 4.12.2).

4.11.2 -каротин, М () = 536,85 г/моль, с массовой долей -каротина не менее 95%.

4.11.3 -каротин, М () = 536,85 г/моль, для качественного анализа.

4.11.4 Ликопин, М () = 536,85 г/моль, для качественного анализа.

4.12 Приготовление исходного раствора

4.12.1 Исходный раствор -каротина

Растворяют 3 мг образца сравнения -каротина (см. 4.11.2) в 20 смдихлорметана, тетрагидрофурана или толуола (см. 4.7), помещая мерную колбу на 30 с в ультразвуковую баню (см. 5.6).

Разбавляют этот раствор н-гексаном до объема 100 см.

Разбавляют 10,0 см полученного раствора н-гексаном до 100 см.

1 см этого раствора содержит 3 мкг -каротина в смеси н-гексан/дихлорметан (98:2) (по объему), смеси н-гексан/тетрагидрофуран (98:2) (в объемном соотношении) или н-гексан/толуол (98:2) (в объемном соотношении).

Хранят исходный раствор в защищенном от света месте при температуре ниже 4°С.

4.12.2 Проверка концентрации и чистоты

Измеряют оптическую плотность исходного раствора -каротина (см. 4.12.1) при длине волны 453 нм на спектрофотометре (см. 5.1). Вычисляют массовую концентрацию , мкг/см, по формуле

,                                                     (1)