Используют только признанные аналитически чистые реактивы, дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты по ISO 6887-1 и ISO 8261/IDF 122.
5.1 Разбавитель
Разбавитель по ISO 6887-1 и ISO 8261/IDF 122.
5.2 Питательная среда
Используют свежеприготовленную питательную среду (MRS и M17), которую нельзя подвергать воздействию прямого солнечного света.
Если приготовленные питательные среды используют не сразу, то их охлаждают и хранят при температуре 2°C-4°C не более 1 недели в условиях, которые не изменяют их состава.
Условия хранения установлены в ISO 7218.
5.2.1 Окисленная среда MRS (см. [7])
5.2.1.1 Состав
Пептон 1 (триптический гидролизат казеина), г | 10,0 | |||
Мясной экстракт, г | 10,0 | |||
Дрожжевой экстракт (сухой), г | 5,0 | |||
Глюкоза (), г | 20,0 | |||
Твин 80 (сорбитан моноолеат), см | 1,0 | |||
Двузамещенный фосфорнокислый калий (), г | 2,0 | |||
Натрия ацетат тригидрат (), г | 5,0 | |||
Цитрат диаммония [], г | 2,0 | |||
Гептагидрат сульфата магния (), г | 0,2 | |||
Сульфат марганца тетрагидрат (), г | 0,05 | |||
Агар, г | 9,0-18,0 |
________________
В зависимости от устойчивости геля в агаре или согласно указаниям изготовителя.
Вода в объеме до, см | 1000 |
5.2.1.2 Приготовление
Каждый компонент растворяют отдельно на водяной бане (6.7) при температуре кипения. Охлаждают на другой водяной бане (6.7) до температуры 50°C. Используя уксусную кислоту (5.3.3), корректируют уровень pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял 5,4±0,1 ед. рН при измерении при помощи pH-метра (6.8) при температуре 25°C±1°C. Среду переносят по 100 см во флаконы вместимостью 150 см (6.10) или по 200 см во флаконы вместимостью 250 см (6.10). Стерилизуют в течение 15 мин в автоклаве при температуре 121°C±1°C.
Примечания
1 Среда MRS высокочувствительна к тепловой обработке, которая может вызвать различия в зависимости от используемого автоклава.
2 Сличительные испытания показали, что коммерчески доступные среды MRS могут дать число микроорганизмов, которое меньше числа, наблюдаемого в среде MRS, приготовленной согласно настоящему стандарту. Поэтому в случае использования коммерчески доступной среды MRS ее следует проверить в сравнении со средой, приготовленной согласно настоящему стандарту.
До начала проведения бактериологического исследования полностью расплавляют необходимое количество среды на водяной бане (6.7) при температуре кипения или путем обработки паром в закрытом контейнере. Затем охлаждают на другой водяной бане (6.7).
5.2.2 Среда M17 (см. [8])
5.2.2.1 Основная среда
5.2.2.1.1 Состав