ГОСТ EN 14663-2014 Продукция пищевая. Определение витамина В(6) (включая гликозилированные формы) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (с Поправками)

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

В ходе анализа используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696 или бидистиллированную воду.

4.2 Фосфат калия двузамещенный, массовая доля ()99,9%.

4.3 Ацетат натрия безводный, ()99,0%.

4.4 Трихлоруксусная кислота (ТХУ), ()99,0%.

4.5 Раствор ацетата натрия молярной концентрацией () = 2,5 моль/дм

205 г ацетата натрия (см. 4.3) растворяют в 1 дм воды.

4.6 Реагент послеколоночный (дополнительно), раствор с концентрацией () = 0,15 моль/дм.

Растворяют 34,2 г фосфата калия двузамещенного (см. 4.2) в воде, доводят до 1000 см, перемешивают и дегазируют.

4.7 Соляная кислота, (HCI) = 1 моль/дм.

4.8 Соляная кислота, (HCI) = 0,1 моль/дм.

4.9 Соляная кислота, (HCI) = 0,2 моль/дм.

4.10 Серная кислота, () = 1 моль/дм.

4.11 Эфир петролейный, диапазон кипения от 40°С до 60°С.

4.12 Фосфатаза кислая из картофеля. Ферментативная активность составляет около 5,3 U/мг.

_______________

U - данная единица измерения (международная или стандартная единица) определяется количеством фермента, который катализирует трансформацию 1 мкмоль субстрата в минуту при стандартных условиях.

Необходимо, чтобы используемый фермент с положительным результатом проходил проверку ферментативной активности согласно 4.13.2 (более подробная информация приведена в [2], [7]).

4.13 Раствор кислой фосфатазы

4.13.1 Общие положения

Растворяют 60 мг кислой фосфатазы (см. 4.12) в 10 см воды в конической колбе, перемешивая в течение 2 мин.

Раствор готовят в день проведения анализа.

4.13.2 Проверка ферментативной активности кислой фосфатазы

Взвешивают 10 г свинины, 5 г картофельного пюре или 5 г муки из цельного зерна в конической колбе и экстрагируют кислотой, как описано в 6.2.1. Добавляют к 12,5 см раствора экстрагированной пробы 1 см раствора кислой фосфатазы (см. 4.13.1) и опционально 1 см раствора -глюкозидазы (см. 4.15) и перемешивают. Инкубируют раствор в течение не менее 12 ч или в течение ночи при температуре 37°С при постоянном перемешивании. Повторяют эту операцию с двойным количеством раствора кислой фосфатазы.

Определяют массовую концентрацию витаминов в соответствии с 6.6. Ферментативная активность используемого фермента считается достаточной, если значения массовой концентрации соединений витамина в обоих растворах пробы эквивалентны. На хроматограмме должен отсутствовать пик фосфата пиридоксамина.

Примечание - Для межлабораторного испытания использовали кислую фосфатазу производства Sigma Nr Р 3752.

_______________