ГОСТ EN 12856-2015 Продукция пищевая. Определение ацесульфама калия, аспартама и сахарина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
4 Реактивы
Для проведения анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696. При приготовлении растворов учитывают массовую долю основного вещества в реактиве.
4.1 Ацетонитрил для ВЭЖХ.
4.2 Метанол для ВЭЖХ.
4.3 Калий фосфорнокислый однозамещенный (KHPO
).
4.4 Калий фосфорнокислый двухзамещенный (KHPO
).
4.5 Кислота фосфорная, (Н
РО
)=1,71 г/см
, w(H
PO
)=85%
.
________________
w - массовая доля.
4.6 Кислота фосфорная, раствор массовой долей w(HPO
)=5%.
Аккуратно переносят пипеткой 6 см фосфорной кислоты (4.5) в мерную колбу вместимостью 100 см
, в которую предварительно помещено 80 см
воды. Объем содержимого в колбе доводят до метки водой.
4.7 Раствор Карреза N 1
Растворяют 15 г гексацианоферрата калия (II) (K[Fe(CN)
]·3H
O) в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см
.
4.8 Раствор Карреза N 2
Растворяют 30 г сульфата цинка (ZnSO·7H
O) в некотором количестве воды и разбавляют до объема 100 см
.
4.9 Фосфатный буферный раствор I, с(KHPO
)=0,02 моль/дм
, рН
4,3
Растворяют 2,72 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.3) в 800 см воды в мензурке вместимостью 1000 см
. Значение рН раствора доводят до 4,3 добавлением раствора фосфорной кислоты (4.6). Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см
, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.
4.10 Фосфатный буферный раствор II, с(KHPO
)=0,0125 моль/дм
, рН
3,5
Растворяют 1,70 г однозамещенного фосфорнокислого калия (4.3) в 800 см воды в мензурке вместимостью 1000 см
. Значение рН раствора доводят до 3,5 добавлением раствора фосфорной кислоты (4.6). Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см
, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.
4.11 Подвижная фаза (смешанный раствор ацетонитрила и фосфатного буферного раствора)
Смешивают точно отмеренные объемы выбранного фосфатного буферного раствора и ацетонитрила в соотношении, приведенном в приложении А (А.5). Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм и дегазируют любым приемлемым способом, например, в течение 5 мин на ультразвуковой бане. Подвижную фазу готовят в день использования.
4.12 Контрольный раствор (на усмотрение пользователей настоящего стандарта)
Контрольный раствор содержит ацесульфам калия, натриевую соль сахарина, аспартам, 5-бензил-3,6-диоксо-2-пиперазинуксусную кислоту (дикетопиперазин), аспартилфенилаланин, фенилаланин, кофеин, сорбиновую и бензойную кислоты, теобромин, гидроксиметилфурфурол и ванилин.
В мерную колбу вместимостью 100 см переносят взвешенные с точностью до 0,1 мг 30 мг ацесульфама калия, 20 мг натриевой соли сахарина, 220 мг аспартама, 60 мг кофеина, 100 мг сорбиновой кислоты, 100 мг бензойной кислоты, 100 мг ванилина, 10 мг дикетопиперазина, 10 мг фенилаланина, 10 мг аспартилфенилаланина, 20 мг гидроксиметилфурфурола и 70 мг теобромина. Растворяют, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.
Пипеткой переносят 20 см полученного раствора в мерную колбу вместимостью 100 см
, объем содержимого в колбе доводят до метки водой.
4.13 Основной стандартный раствор
Взвешивают с точностью до 0,1 мг 100 мг ацесульфама калия, 100 мг натриевой соли сахарина, 100 мг аспартама и переносят в мерную колбу вместимостью 100 см. Растворяют, объем содержимого в колбе доводят до метки водой. Массовая концентрация каждого подсластителя в полученном растворе составляет 1 г/дм
.
4.14 Градуировочные растворы (указанный диапазон массовых концентраций носит рекомендательный характер)
4.14.1 Градуировочный раствор I