ГОСТ EN 15652-2015 Продукты пищевые. Определение ниацина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

При проведении анализа, если не оговорены другие условия, используют только реактивы установленной аналитической чистоты и воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696.

4.2 Требования к химическим реактивам и приготовление растворов

4.2.1 Ацетат натрия, массовая доля основного вещества w(CHNaO) не менее 99%.

4.2.2 Гидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(KHPO) не менее 99,5%.

4.2.3 Дигидрофосфат калия, массовая доля основного вещества w(KHPO) не менее 99,5%.

4.2.4 Раствор пероксида водорода, нестабилизированный, массовая доля пероксида водорода w(HO)=30%.

4.2.5 Сульфат меди, массовая доля основного вещества w(CuSO·5HO) не менее 99%.

4.2.6 Уксусная кислота, массовая доля основного вещества w(CHCOOH) не менее 99,8%.

4.2.7 Концентрированная соляная кислота (для способов А и С), w(НСl)=37,0%.

4.2.8 НАД+-гликогидролаза из Neurospora crassa (для способа В), активность 0,55 МЕ/мг белка.

Хранят при температуре ниже 0°С.

Примечание - При межлабораторных сравнительных испытаниях была использована лиофилизированная НАД+-гликогидролаза (NADase), выделенная из Neurospora crassa, производства компании "Сигма", номер по каталогу N9629, активностью от 0,5 до 3,0 МЕ/мг белка (биурет).

_______________

Эта информация приведена только для удобства пользователя настоящего стандарта и не означает поддержки данного продукта со стороны CEN. Допускается использование аналогичных продуктов, если доказано, что их использование приводит к аналогичному результату.

4.2.9 Раствор уксусной кислоты, молярная концентрация с(СНСООН)=5 моль/дм.

4.2.10 Раствор ацетата натрия, молярная концентрация c(CHNaO)=2,5 моль/дм.

4.2.11 Раствор сульфата меди, молярная концентрация c(Cu(ll)SO·5HO)=0,005 моль/дм.

4.2.12 Приготовление раствора ацетата натрия молярной концентрации c моль/дм с pH 4,5

4,10 г ацетата натрия (4.2.1) растворяют в 900 см воды. Доводят значение pH раствора до 4,5 при помощи уксусной кислоты (4.2.6) и затем разбавляют водой до 1000 см.

4.2.13 Приготовление фосфатного буферного раствора (для способа В) с pH 6,8

Одну объемную часть раствора гидрофосфата калия молярной концентрации 0,05 моль/дм смешивают с 1 объемной частью раствора дигидрофосфата калия молярной концентрации 0,05 моль/дм. При необходимости доводят значение pH раствора до значения 6,8 при помощи раствора ацетата натрия (4.2.10).

4.2.14 Приготовление раствора НАД+-гликогидролазы (для способа В)

2,9 мг НАД+-гликогидролазы (4.2.8) растворяют в 5 см фосфатного буферного раствора (4.2.13). Срок хранения раствора - 7 дней при минус 18°С.

4.2.15 Раствор соляной кислоты (для способов А и С) молярной концентрации c(HCI)=0,1 моль/дм.

4.2.16 Подвижная фаза для ВЭЖХ

4,77 г дигидрофосфата калия (4.2.3) растворяют в 400 см воды, добавляют 3,8 смраствора пероксида водорода (4.2.4) и 0,5 см раствора сульфата меди (4.2.11) и разбавляют водой до 500 см. Значение pH раствора составляет приблизительно 4,5. Раствор фильтруют через мембранный фильтр (5.7). Срок хранения - 1 день.

4.2.17 Гидроксид натрия (для способа С), массовая доля основного вещества w(NaOH) не менее 99%.