ГОСТ 33675-2015 Животные. Лабораторная диагностика бруцеллеза. Бактериологические методы (с Поправками)

     7 Бактериоскопический метод

7.1 Сущность метода

Сущность бактериоскопического метода заключается в окрашивании мазков и мазков-отпечатков из патологического материала и последующем микроскопическом выявлении клеток бруцелл.

7.2 Подготовка к исследованию

7.2.1 Подготовка растворов для окраски

7.2.1.1 Приготовление кристаллического фиолетового и генцианового фиолетового

Берут 1 г кристаллического фиолетового или генцианового фиолетового и растирают в ступке с 2 г фенола, добавляя небольшими порциями 96%-ный этиловый спирт в объеме 10 см. После полного растворения краски в ступку при постоянном помешивании добавляют 100 см дистиллированной воды. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр в колбу вместимостью 200 см.

Срок хранения растворов при температуре от 2°С до 10°С - не более 6 мес.

7.2.1.2 Приготовление раствора Люголя

Для приготовления раствора Люголя в 10 см дистиллированной воды растворяют 2 г йодистого калия. Затем прибавляют 1 г кристаллического йода. Раствор выдерживают в течение 5-6 ч до полного растворения йода и добавляют 290 см дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 10°С в склянке из темного стекла - не более 30 сут.

7.2.1.3 Приготовление карболового фуксина Циля

Для приготовления карболового фуксина Циля 1 г основного кристаллического фуксина растирают в ступке с 5 г кристаллического фенола и 0,5 см глицерина, добавляя небольшими порциями 96%-ный этиловый спирт в объеме 10 см, а затем при постоянном помешивании в ступку добавляют 100 см дистиллированной воды. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр в колбу вместимостью 200 см.

Срок хранения раствора при температуре 18°С-22°С во флаконах из темного стекла с притертой пробкой - не более 6 мес.

Непосредственно перед работой к одной части полученного раствора карболового фуксина Циля добавляют девять частей дистиллированной воды.

7.2.1.4 Приготовление 0,75%-ного и 1,0%-ного водных растворов малахитового зеленого

Берут 0,75 или 1,00 г малахитового зеленого и растворяют в 100 см кипящей дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

7.2.1.5 Приготовление 0,5%-ного раствора уксусной кислоты

Берут 0,5 см уксусной кислоты и добавляют 99,5 см дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

7.2.1.6 Приготовление 1%-ного водного раствора метиленового синего

Берут 1 г метиленового синего и растворяют в 100 см дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

7.2.1.7 Приготовление 2%-ного водного раствора сафранина

Берут 2 г сафранина и растворяют в 100 см дистиллированной воды.

Срок хранения раствора при температуре от 2°С до 8°С - не более 1 мес.

7.2.1.8 Приготовление 5%-ного спиртового раствора йода

Берут 5 г кристаллического йода и переносят в мерную колбу вместимостью 250 см, добавляют 10 г калия иодида и равные объемы дистиллированной воды и 96%-ного этилового спирта, доводя раствор до объема 100 см.

Срок хранения раствора при температуре не выше от 2°С до 25°С в склянке из темного стекла - не более пяти лет.