8.1 Сущность метода
Сущность культурального метода заключается в посеве патологического материала на питательные среды с последующим культивированием, идентификацией и дифференциацией выделенной культуры.
8.2 Подготовка к исследованию
8.2.1 Приготовление мясной воды
Для приготовления мясной воды свежее мясо крупного рогатого скота освобождают от костей, жира и сухожилий и пропускают через мясорубку. 500 г фарша заливают 1 дм
водопроводной воды и выдерживают в течение 15-18 ч в прохладном месте. Затем сливают полученный настой в колбу вместимостью 2 дм или кастрюлю из нержавеющей стали вместимостью 3 дм и кипятят в течение 30-40 мин на электрической или газовой плите, доливают дистиллированную воду до объема 1 дм и фильтруют через ватно-марлевый или тканевый фильтр. Полученную мясную воду стерилизуют в автоклаве при температуре 121°С в течение 20 мин.
Срок хранения мясной воды в стеклянных бутылях вместимостью 5-15 дм при температуре от 2°С до 25°С - не более одного года.
8.2.2 Приготовление печеночной воды
Для приготовления печеночной воды свежую печень крупного рогатого скота освобождают от жира, канальцев, пленок и пропускают через мясорубку. В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм вносят 500 г фарша, заливают 1 дм водопроводной воды, настаивают в течение 1 ч и кипятят на электрической или газовой плите при периодическом помешивании в течение 30 мин. После отстаивания фарш удаляют, а полученную жидкость доводят до 1 дм дистиллированной водой и фильтруют через ватно-марлевый фильтр или тканевый фильтр. Полученную печеночную воду разливают по колбам и стерилизуют при температуре 115°С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин.
Срок хранения печеночной воды в стеклянных бутылях вместимостью 5-15 дм при температуре от 2°С до 25°С - не более одного года.
8.2.3 Приготовление МППГГБ
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм наливают 610 см мясной воды по 8.2.1 и 305 см печеночной воды по 8.2.2, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия. Смесь кипятят на электрической или газовой плите в течение 30 мин, устанавливают рН 7,2-7,4 10%-ным раствором натрия гидроокиси, добавляют 10 г глюкозы и 20 см глицерина и фильтруют через ватно-марлевый или тканевый фильтр. Полученную среду разливают в пробирки по 7-8 см или во флаконы по 250-300 см соответствующей вместимости и стерилизуют при температуре 115°С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин. рН среды после стерилизации составляет 6,8-7,0.
Срок хранения МППГГБ в пробирках и флаконах при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.
(Поправка. ИУС № 6-2024).
8.2.4 Приготовление МППГГА
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм наливают 610 см мясной воды по 8.2.1 и 305 см печеночной воды по 8.2.2, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 20-30 г микробиологического агара, предварительно промытого и хорошо отжатого. Смесь кипятят на электрической или газовой плите в течение 1 ч, устанавливают рН 7,2-7,4 10%-ным раствором гидроокиси натрия и добавляют 10 г глюкозы и 20 см глицерина и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Полученную среду разливают в пробирки или флаконы вместимостью 500 см и стерилизуют при температуре 115°С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин. рН среды после стерилизации составляет 6,8-7,0.
Срок хранения МППГГА в пробирках и флаконах при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.
8.2.5 Приготовление МППБ
МППБ готовят аналогично МППГГА по 8.2.3 без добавления глюкозы и глицерина.
Срок хранения МППБ при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.
(Поправка. ИУС № 6-2024).
8.2.6 Приготовление сывороточно-декстрозного агара
В емкость из нержавеющей стали с крышкой вместимостью 3 дм наливают 835 см дистиллированной воды, добавляют 20 г пищевого или микробиологического агара, 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 165 см мясной воды по 8.2.1. Полученную смесь кипятят на электрической или газовой плите при периодическом помешивании в течение 30 мин до расплавления агара, рН до стерилизации - 7,8. Затем стерилизуют в автоклаве текучим паром в течение 1 ч. После автоклавирования среду отстаивают в течение 1 ч, затем фильтруют через ватный или бумажный фильтр, доводят рН среды до 7,2-7,4 10%-ным раствором гидроокиси натрия, разливают в колбы (пробирки, флаконы) и стерилизуют при температуре 115°С и давлении 0,07 МПа в течение 30 мин. После стерилизации рН среды составляет 6,8 -7,0.
Срок хранения сывороточно-декстрозного агара при температуре от 2°С до 8°С - не более 3 мес.
Перед применением среду в колбах (пробирках, флаконах) расплавляют в кипящей водяной бане, охлаждают до температуры 50°С-60°С и добавляют 40%-ный стерильный раствор глюкозы в количестве 1% к объему питательной среды во флаконе (например, 2,5 см 40%-ного стерильного раствора глюкозы добавляют к 97,5 см питательной среды).
8.2.7 Приготовление селективной добавки для внесения в питательные среды
Содержимое флакона по 5.4 растворяют в 5 см 50%-ного метилового спирта и перемешивают до образования гомогенной суспензии.
Раствор используют свежеприготовленным.
Полученное количество селективной добавки стерильно добавляют к 500 см расплавленной питательной среды.
8.3 Проведение исследования
