ГОСТ 33422-2015 Мясо и мясные продукты. Определение массовой доли йодтирозинов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (Переиздание)

     9 Проведение измерений

9.1 Хроматографические условия измерений

Условия проведения ВЭЖХ-МС/МС анализа подбирают в зависимости от вида применяемого жидкостного хроматографа, масс-спектрометрического детектора и хроматографической колонки.

В качестве примера могут быть приведены следующие условия определения йодтирозинов (МИТ и ДИТ), выполненные на системе ВЭЖХ-МС/МС с хроматографической колонкой С18, 4,6x50 мм, 1,8 мкм.

Разделение проводят в режиме градиентного элюирования (приготовление растворов элюентов по 8.2.5). Объем вводимой пробы - 0,01 см.

Таблица 1 - Параметры и условия ВЭЖХ

9.2 Параметры настройки масс-спектрометрического детектора

Для анализа подобраны следующие параметры масс-спектрометрического детектирования:

Температура источника - 100°C;

Температура газа десольвации - 320°C;

Скорость потока газа десольвации - 8 дм/мин;

Давление иглы распылителя - 2,07 Бар (30 psi).

Условия регистрации аналитических сигналов в режиме мониторинга множественных реакций (MRM) представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условия ионизации распылением в электрическом поле (ESI) с регистрацией положительных ионов

Условия детектирования оптимизируют в ручном режиме. Для этого используют градуировочные растворы индивидуальных йодтирозинов (МИТ или ДИТ) концентрации 100, 10 и 1 нг/см, приготовленные по 8.1.

При этом, соотношение сигнал/шум (S/N) молекулярного иона должно быть не менее 1:10. Напряжение на фрагменторе оптимизируют с шагом 10 V по максимальному отклику протонированного молекулярного иона. Энергию диссоциации (CE) оптимизируют с шагом 5V по максимальному отклику характерного дочернего иона.

9.3 Градуировка ВЭЖХ-МС/МС системы

Приготовленные по 8.1 градуировочные растворы подвергают ВЭЖХ-МС/МС анализу в условиях, выбранных в соответствии с 9.1-9.2. Проводят по три параллельных измерения для каждой концентрации градуировочных растворов. Полученные хроматограммы обрабатывают с использованием компьютерной системы обработки данных хроматографа. Определяют абсолютное время удерживания йодтирозина (МИТ или ДИТ). С использованием средств программного обеспечения строят градуировочную зависимость площади пика определяемого йодтирозина (МИТ или ДИТ) от концентрации йодтирозина (МИТ или ДИТ) в пробе.

Коэффициент линейной корреляции полученной градуировочной зависимости должен быть не менее 0,99. При невыполнении этого условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. В случае необходимости готовят новые градуировочные растворы.

Хроматограмма и калибровочные кривые градуировочных растворов йодтирозинов представлены в приложении A.

Проведение градуировки обязательно при замене хроматографической колонки, а также при систематическом получении неудовлетворительных результатов контроля, выполняемого по 12.

9.4 Контроль аналитической системы

Контроль выполняют с использованием приготовленных по 8.1 градуировочных растворов. Полученный результат анализа не должен отличаться от действительного значения концентрации определяемых йодтирозинов (МИТ и ДИТ) в градуировочном растворе более чем на 3%, относительное стандартное отклонение времени удерживания аналитов не более чем на 5%. В случае невыполнения указанного критерия стабильности градуировочной характеристики, проводят новую градуировку.