ГОСТ EN 14526-2015 Продукты пищевые. Определение сакситоксина и DC-сакситоксина в мидиях. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением предколоночной дериватизации методом пероксидного или периодатного окисления
3 Сущность метода
Паралитические токсины моллюсков экстрагируют из гомогенизированной пробы уксусной или соляной кислотой. После центрифугирования надосадочную жидкость очищают методом твердофазной экстракции на патроне с обращенно-фазовым сорбентом (). Аликвоту экстракта подвергают дериватизации перекисью водорода.
Предупреждение - Паралитические токсины моллюсков являются сильными нейротоксинами. При проведении испытания следует использовать перчатки и защитные очки, а все операции по подготовке стандартных растворов и проб следует проводить в вытяжном шкафу.
При дериватизации сакситоксина и DC-сакситоксина образуются различные продукты окисления, которые определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием обращенно-фазовой колонки и флуориметрического детектирования. В таблице 1 приведены производные сакситоксина и DC-сакситоксина, образующиеся при дериватизации перекисью водорода.
Таблица 1 - Производные сакситоксина и DC-сакситоксина, образующиеся при дериватизации перекисью водорода
Токсин | Последовательность элюирования | Интенсивность аналитического сигнала | Характеристика продукта реакции |
Сакситоксин | 1 | + | Продукт окисления N 1 |
2 | + | Продукт окисления N 2 | |
3 | ++ | Продукт окисления сакситоксина | |
DC-сакситоксин | 1 | ++ | Продукт окисления N 1 |
2 | + | Продукт окисления N 2 |
Приведенный в настоящем стандарте метод пригоден для количественного определения сакситоксина и DC-сакситоксина. Однако следует принимать во внимание указанные ниже особенности.
Совместное присутствие в пробе различных паралитических токсинов может оказывать взаимное влияние на результат определения каждого из них в отдельности, поскольку при дериватизации различных токсинов частично могут образовываться одни и те же производные. Поэтому следует проявлять тщательность при интерпретации хроматограмм.
На результат определения сакситоксина не оказывает влияния присутствие в пробе других паралитических токсинов при дериватизации путем окисления перекисью водорода.
На результат определения DC-сакситоксина оказывает незначительное влияние присутствие сакситоксина, поскольку один из продуктов пероксидного окисления сакситоксина практически идентичен основному производному DC-сакситоксина (см. таблицу 1). Вклад производного сакситоксина, пик которого имеет то же время удерживания, что и пик основного производного DC-сакситоксина, в величину пика последнего составляет примерно 4% ([4], [5]).
Токсины водорослей-динофлагеллятов GTX-2 и GTX-3 преобразуются при пероксидной дериватизации в такие же производные, а токсины GTX-1 и GTX-4 при этом не обнаруживаются. Периодатное окисление GTX-1, GTX-2, GTX-3 и GTX-4 приводит к образованию таких же производных. Токсины GTX-5 и нео-STX обнаруживаются только при периодатном окислении.