ГОСТ EN 14176-2015 Продукты пищевые. Определение домоевой кислоты в мидиях методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (Переиздание)

     7 Процедура проведения испытания

7.1 Общие положения

Всю процедуру испытания необходимо провести за один рабочий день. В течение этого дня при перерывах в проведении испытания пробы и экстракты охлаждают до температуры 4°С-7°С.

Предупреждение - Домоевая кислота в экстракте из пробы нестабильна. Поэтому следует строго соблюдать требования настоящего стандарта относительно температуры и кислотности экстракта на отдельных этапах, а также продолжительности проведения отдельных операций.

Примечание - В кислой среде при комнатной температуре домоевая кислота подвергается медленному разрушению. При хранении экстрактов при комнатной температуре в течение четырех или пяти дней концентрация домоевой кислоты в них уменьшается на 30%-50%. При хранении экстрактов охлажденными до 4°С заметного изменения концентрации домоевой кислоты в них не наблюдается в течение трех недель [2].

7.2 Подготовка пробы

Мидии снаружи тщательно промывают водой. Пальцами одной руки аккуратно раздвигают створки раковины так, чтобы между ними образовалась узкая щель, в которую вводят лезвие небольшого ножа до тех пор, пока острие не упрется во внутреннюю стенку одной из створок. Сохраняя острие ножа в этом положении, движением лезвия отрезают приводящую мышцу. Поднимают одну створку, после чего внутреннюю часть мидии промывают водой для удаления песка или других примесей. Ножом вырезают мякоть мидии из другой створки.

Перед вскрытием мидий не допускается их нагревать или использовать анестезию. Также не допускается разрезать или повреждать мякоть мидий на этом этапе. Мякоть мидий массой от 100 до 150 г выдерживают на сите в течение 5 мин. Удаляют частицы скорлупы и отбрасывают вытекшую жидкость, после чего мякоть измельчают с помощью блендера или измельчителя по 5.2 до достижения гомогенного состояния.

7.3 Экстракция и очистка экстракта

В стакан вместимостью 250 см помещают гомогенизированную мякоть мидий массой примерно 50 г, взвешенной с точностью до 0,1 г. В стакан добавляют 50 см раствора соляной кислоты по 4.2, содержимое стакана тщательно перемешивают и быстро (в течение 10 мин) нагревают до кипения. Содержимое стакана выдерживают в кипящем состоянии точно 5 мин при постоянном перемешивании, после чего стакан с содержимым немедленно помещают в ледяную баню и охлаждают до комнатной температуры в течение примерно 10 мин.

Далее смесь переносят в градуированный цилиндр с пробкой вместимостью 100 см или мерную колбу и доводят объем содержимого в них до 100 см раствором соляной кислоты по 4.2, после чего содержимое колбы или цилиндра перемешивают до достижения однородного состояния смеси.

Порцию полученной смеси объемом не менее 50 см переносят в центрифужную пробирку по 5.5 и центрифугируют в течение 5 мин при факторе разделения 700 g. Пипеткой переносят 5 см прозрачной надосадочной жидкости в мерную колбу вместимостью 50 см, объем содержимого в колбе доводят до метки водой, содержимое тщательно перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр по 5.3. Фильтрат объемом от 1 до 2 см собирают в подходящий флакон и используют для хроматографического анализа. Если концентрация домоевой кислоты слишком высока для количественного определения, полученный раствор разбавляют до достижения концентрации, приемлемой для количественного определения.

Примечания

1 Увеличение продолжительности кипячения приводит к уменьшению полноты обнаружения домоевой кислоты. При кипячении в течение 10 мин полнота обнаружения домоевой кислоты на 7% меньше, чем при кипячении в течение 5 мин [2].

2 Охлаждение экстракта при комнатной температуре и его хранение при комнатной температуре приводит к уменьшению полноты обнаружения домоевой кислоты. Полнота обнаружения существенно выше при использовании быстрого охлаждения в холодильнике, морозильной камере или ледяной бане и при хранении растворов проб в охлажденном виде до проведения анализа [2].

7.4 Количественное определение

Проводят хроматографический анализ градуировочного раствора домоевой кислоты по 4.6 при объеме инжекции 20 мм несколько раз до тех пор, пока расхождение между результатами измерений площади или высоты пика домоевой кислоты для трех последовательных инжекций не будет превышать 3%. При анализе серии растворов проб чередуют анализ раствора пробы и градуировочного раствора.

7.5 Идентификация аналита     

Пик домоевой кислоты на хроматограмме раствора пробы можно идентифицировать путем хроматографического анализа раствора пробы с добавкой градуировочного раствора.