ГОСТ EN 12014-3-2015 Продукты пищевые. Определение содержания нитрата и/или нитрита. Часть 3. Спектрофотометрический метод определения содержания нитрата и нитрита в мясных продуктах с применением ферментативного восстановления нитрата до нитрита (Переиздание)

     6 Процедура проведения испытания

6.1 Приготовление раствора пробы для анализа

Пробу гомогенизируют с использованием подходящего оборудования по 5.2. При этом следует обращать внимание на то, чтобы температура пробы при гомогенизации не превышала 25°С. При использовании мясорубки пробу пропускают через нее не менее двух раз.

Из гомогенизированной пробы отбирают пробу для анализа массой примерно 10 г, взвешенной с погрешностью ±0,01 г, и помещают ее в широкогорлую коническую колбу. В колбу добавляют 50 см воды, содержимое колбы гомогенизируют в течение 30-60 с. Диспергирующий элемент гомогенизатора ополаскивают примерно 50 см горячей воды, смыв добавляют в колбу с пробой для анализа. Значение рН полученной смеси доводят до 8,0-8,5 по рН-метру добавлением раствора гидроксида натрия по 4.2, после чего полученную смесь выдерживают 15 мин на кипящей водяной бане при периодическом перемешивании.

Примечание - При испытании сырокопченых колбас следует обращать внимание, чтобы значение рН экстракта не превышало 8,5. В противном случае, после добавления растворов Карреза будет затруднительно получить прозрачный фильтрат. При испытании вареных колбас вероятность такого эффекта мала, поэтому допускается, чтобы значение рН смеси достигало 9,5.

После охлаждения до комнатной температуры содержимое колбы количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 см. В колбу последовательно вносят по 4 см растворов Карреза 1 по 4.3 и Карреза 2 по 4.4, перемешивая содержимое колбы после каждого внесения. Объем содержимого в мерной колбе доводят до метки водой, содержимое колбы перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр по 5.4, отбрасывая первые 20 см фильтрата. Полученный затем прозрачный фильтрат используют в качестве раствора пробы для дальнейшего испытания.

6.2 Проведение градуировки

6.2.1 Построение градуировочного графика для определения нитрита

В пробирки вносят по 2,0 см каждого градуировочного раствора нитрита натрия по 4.7.4, 1,0 см воды и 3,0 см смешанного реактива для цветной реакции по 4.6.3. Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают в темноте при комнатной температуре 30 мин. По истечении указанного времени измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре по 5.6 при длине волны 540 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Градуировочный график строят, откладывая в системе координат измеренные значения оптической плотности четырех растворов нитрита натрия по 4.7.4 против соответствующих им масс нитрит-иона в миллиграммах на 200 см раствора.

6.2.2 Построение градуировочного графика для определения нитрата (определения нитрита после восстановления нитрата)

В пробирки вносят по 0,2 см раствора по 4.5.2, 2,0 см каждого градуировочного раствора нитрата калия по 4.8.4 и 0,8 см буферного раствора нитратредуктазы по 4.5.3. Содержимое пробирок перемешивают и выдерживают 1 ч при комнатной температуре. Затем в пробирки вносят по 3,0 см смешанного реактива для цветной реакции по 4.6.3, содержимое пробирок перемешивают и выдерживают в темноте в течение 30 мин. По истечении указанного времени измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре по 5.6 при длине волны 540 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Градуировочный график строят, откладывая в системе координат измеренные значения оптической плотности четырех растворов нитрата калия по 4.8.4 после восстановления нитрата до нитрита против соответствующих им масс нитрит-иона в миллиграммах на 200 см раствора.

6.3 Количественное определение нитрита

В кювету спектрофотометра вносят 2,0 см раствора пробы по 6.1, 1,0 см воды и 3,0 см смешанного реактива для цветной реакции по 4.6.3. Содержимое кюветы перемешивают и выдерживают в темноте в течение 30 мин. По истечении указанного времени измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре по 5.6 при длине волны 540 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

6.4 Определение общего содержания нитрита после восстановления нитрата до нитрита

В кювету спектрофотометра вносят 0,2 см раствора по 4.5.2, 2,0 см раствора пробы по 6.1 и 0,8 см раствора нитратредуктазы по 4.5.3. Содержимое кюветы перемешивают и выдерживают 1 ч при комнатной температуре. Затем в кювету добавляют 3,0 см смешанного реактива для цветной реакции по 4.6.3, содержимое кюветы перемешивают и выдерживают в темноте в течение 30 мин. По истечении указанного времени измеряют оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре по 5.6 при длине волны 540 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.