Количественный микробиологический контроль гигиены отбора и обработки спермы быков имеет большое значение в обеспечении эффективности искусственного осеменения и выполнении требований биобезопасности [1]. По этой же причине очень важно исследование бактериальной загрязненности и возможного присутствия факультативных патогенных микроорганизмов в замороженной сперме быков.
Существует необходимость в разработке международного метода, подходящего для подсчета микроорганизмов в замороженной сперме, который указывал бы на гигиенический статус в период отбора проб, обработки и хранения. Метод подсчета колоний, указанный в настоящем стандарте, устанавливает правила подсчета сапрофитных микроорганизмов, которые изначально присутствуют или поступили в сперму быков из окружающей среды. С помощью этого метода обнаруживают только общее количество бактерий, главным образом аэрофильные и мезофильные сапрофиты, а также некоторые факультативно патогенные микроорганизмы, не очень чувствительные к условиям окружающей среды.
Поскольку образцы замороженной спермы крупного рогатого скота дополнительно содержат антибиотики, определение микробиологической загрязненности данного типа образцов несколько отличается от общепринятых микробиологических методов. При исследовании образцов замороженной спермы при низком разведении число колоний может быть ниже, чем ожидалось, и не отвечать обычным пропорциям. Поэтому для компенсации эффекта действия антибиотиков необходимо использовать относительно высокое десятикратное разведение. В результате использования высокого разведения в каждой чашке Петри получают 15 или меньшее количество колоний, и результат подсчета этих колоний должен быть принят как окончательный. В этом состоит отличие от обычного микробиологического исследования пищевых продуктов, при котором разведение образцов может быть выбрано таким образом, что число колоний в чашке Петри для более точного исследования может быть 15 и более.
Микробиальные клетки часто образуют в образце сгустки или группы. Встряхивание проб и разведение позволяют равномерно распределить сгустки бактерий, но не разбивают их полностью до отдельных клеток. В последующем каждая колония, появляющаяся на среде, может вырасти как от сгустка, так и от одной клетки, это позволяет получить более точный результат по числу колониеобразующих единиц по сравнению с результатом по числу микроорганизмов [2].
Настоящий стандарт устанавливает значение допустимого предела не для всех КОЕ-бактерий, которые могут быть затребованы покупателями в торговле. Это должно быть указано в коммерческих контрактах.