ГОСТ 33163-2014 Продукция соковая. Определение бактерий рода Alicyclobacillus

     8 Методы выявления в определенной массе или объеме соковой продукции бактерий рода Alicyclobacillus* и методы подсчета их количества

_________________

* Слово "Alicyclobacillus" в наименовании раздела 8 в бумажном оригинале выделено курсивом. - Примечание изготовителя базы данных.

8.1 Метод мембранной фильтрации

8.1.1 Сущность метода

Метод основан на фильтровании определенной массы осветленной концентрированной соковой продукции или определенного объема соковой продукции в потребительской упаковке, раствора сахара или питьевой воды или их разведений через мембранный фильтр, переносе фильтров на поверхность плотной среды, последующем инкубировании посевов на фильтрах и подсчете выросших колоний.

Метод мембранной фильтрации применяют при содержании менее 150 КОЕ в 1 см для осветленной соковой продукции в потребительской упаковке или менее 1500 КОЕ в 1 г для концентрированной осветленной соковой продукции.

Перед фильтрацией осветленных концентрированных соков готовят их исходное разведение.

8.1.2 Приготовление исходной суспензии и последующих десятикратных разведений

Исходную суспензию продукта и последующие десятикратные разведения из нее готовят по [1].

Для приготовления исходного разведения осветленного концентрированного сока 10 г пробы, отобранной по разделу 7, помещают в коническую колбу вместимостью 250 см, разводят физиологическим раствором в соотношении 1:10 и тщательно перемешивают.

Последующие десятикратные разведения осветленного концентрированного сока, осветленной соковой продукции в потребительской упаковке готовят по [1] таким образом, чтобы на поверхности мембранного фильтра вырастало от 10 до 15 типичных колоний.

Готовят параллельно две исследуемые пробы.

8.1.3 Тепловой удар

При выявлении или определении количества спор бактерий рода Alicyclobacillus, а также для стимулирования образования спор при проведении подтверждения принадлежности бактерий к роду Alicyclobacillus проводят прогрев проб соковой продукции или прогрев суспензий выявленных культур микроорганизмов (тепловой удар). Задача обработки тепловым ударом состоит в стимулировании спорообразования и инактивации вегетативных клеток.

Прогревают две колбы с пробами, подготовленными по 8.1.2, содержащих по 100 см исходной суспензии продукта или ее разведения, в течение 10 мин при температуре (80±1)°С на водяной бане, следя за тем, чтобы уровень воды в бане был выше уровня пробы, и чтобы время достижения температуры пробы до (80±1)°С не превышало 5 мин. После прогревания извлекают колбы с пробами и быстро охлаждают их до 40°С, охлаждая колбу под струей холодной воды.

Прогрев суспензий выявленных культур микроорганизмов проводят в пробирках. Суспензии готовят из выросших колоний на физиологическом растворе.

8.1.4 Проведение посева

Подготовку чашек Петри со средой к посеву и посев проводят по ГОСТ ISO 7218.

Одновременно для контроля стерильности плотных питательных сред в контрольную стерильную чашку Петри наливают около 15 см среды и инкубируют вместе с посевами.

Содержимое каждой из двух колб, подготовленных по 8.1.2 или 8.1.3, фильтруют асептически с применением мембранных фильтров и смывают остатки пробы с боковых частей установки для фильтрования примерно 20 см стерильной дистиллированной воды или физиологического раствора.

Первый мембранный фильтр асептически переносят на поверхность среды К-агар, а второй фильтр переносят на поверхность YSG-агара или ВАТ-агара, разлитых в чашки Петри, избегая образования пузырьков воздуха между средой и фильтром. Поверхность фильтра с осевшими на ней бактериями должна быть обращена вверх.

Посевы и контрольные чашки Петри со средой инкубируют вместе при одинаковых условиях.

8.1.5 Культивирование посевов

Переворачивают чашки Петри с посевами (см. 8.1.4) и с контролем плотных питательных сред крышкой вниз, помещают в термостат и инкубируют при температуре (45±1)°С в течение (48±2) ч.

При термостатировании посевов проводят ежедневные наблюдения за появлением признаков развития микроорганизмов.

Если после двух суток термостатирования в посевах нет признаков роста бактерий, то общее время инкубации продлевают еще на (72±2) ч.

Примечание - Посевы следует защищать от высыхания во время инкубации, поместив их в стерильный пластиковый пакет или иной герметичный контейнер.