ИНСТРУКЦИЯ
ПО КОНТРОЛЮ СТЕРИЛЬНОСТИ КОНСЕРВИРОВАННОЙ КРОВИ, ЕЕ КОМПОНЕНТОВ, ПРЕПАРАТОВ, КОНСЕРВИРОВАННОГО КОСТНОГО МОЗГА, КРОВЕЗАМЕНИТЕЛЕЙ И КОНСЕРВИРУЮЩИХ РАСТВОРОВ

УТВЕРЖДАЮ

Первый Заместитель Министра здравоохранения РФ А.Д.Царегородцев 29 мая 1995 г.

СОГЛАСОВАНО

Начальник Управления организации медицинской помощи населению А.Н.Деменков 29 мая 1995 г.

Медицинские иммунобиологические препараты (МИБП) - консервированная кровь, ее компоненты, препараты, консервированный костный мозг, а также кровезаменители и консервирующие растворы должны быть стерильны. Стерильность препаратов достигается соблюдением необходимых санитарно-гигиенических условий их изготовления и режима стерилизации.

1.1*. Отбор образцов для анализа

________________

* Нумерация соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.     

Определение стерильности образцов проводят в условиях асептики с применением одной универсальной тиогликолевой среды. Тиогликолевая среда обеспечивает выявление различных микроорганизмов и нейтрализует действие ртутного консерванта (мертиолята), прибавляемого в различные препараты.

1.1.1. Отбор образцов при производственном контроле проводят ежедневно от работы каждого бокса, парового стерилизатора (автоклава), стерилизующей системы, сублимационного аппарата.

1.1.2. Каждая доза заготовленной цельной крови или компонентов крови, предназначенных для переливания, составляет одну серию, в связи с этим нельзя испытывать их на стерильность с помощью метода, при котором герметичность емкости (бутылки, полимерного контейнера) нарушается до переливания. Поэтому контроль стерильности крови и ее компонентов осуществляют путем исследования образцов, выборочно изъятых из общего количества заготовленных емкостей.

1.1.3. Количество проб консервированной крови составляет 2% от числа заготовленных бутылок. Если количество бутылок менее 100, на бактериологический контроль направляют один образец. Кровь, заготовленную в полимерные емкости, контролируют в количестве 1% от числа неиспользованных контейнеров, с истекшим сроком хранения.

1.1.4. Консервированный костный мозг (донорский или кадаверный) отбирают для контроля в количестве 3-5 мл от каждого образца в пустой стерильный флакон.

1.1.5. Компоненты крови - эритроцитную массу, эритроцитную взвесь, нативную плазму, плазму нативную концентрированную, криопреципитат и др. отбирают на бактериологический контроль в стерильные сухие флаконы в количестве не менее 5 мл в начале, середине и конце работы производственного бокса. Компоненты, заготовленные в полимерные контейнеры, отбирают на контроль выборочно в количестве 1 образца от числа заготовленных емкостей.

Плазма гипериммунная, заготовленная методом плазмафереза, контролируется выборочно из числа неиспользованных емкостей (1%) с истекшим сроком хранения.

Концентраты лейкоцитов, тромбоцитов и отмытые размороженные эритроциты контролю не подлежат, так как они используются по инструкции в течение 24 часов после заготовки крови.

1.1.6. Препараты крови - растворы альбумина (5, 10, 20%), протеин, плазмол, фибриноген, полибиолин, тромбин, фибринолизин, препараты иммуноглобулинов, аминокровин и др. контролируют в процессе стерилизующей фильтрации и розлива. Для контроля берут в стерильные сухие флаконы не менее 5 мл раствора в начале, середине и конце розлива.

При розливе препаратов, которые в дальнейшем подвергаются лиофильной сушке, необходимо оставлять до окончания контроля стерильности высушенной продукции утроенное количество образцов разлитого препарат герметически укупоренного. Эти образцы исследуют в случае пророста образцов высушенного препарат для выяснения инфицирования.

1.1.7. Препараты крови: плазма сухая (с глюкозой, с викасолом), фибриноген, криопреципитат сухой и др. отбирают на контроль по 1 образцу от каждой кассеты, этажерки или полки.

1.1.8. Тромбин в мелкой расфасовке отбирают по 2 флакона (ампулы) от кассеты.

1.1.9. Губку гемостатическую и биологический антисептический тампон отбирают на контроль в количестве 2% от серии.

1.1.10. Пленку фибринную изогенную, подвергающуюся стерилизации паром под давлением, отбирают в количестве не менее 2-х образцов из различных мест парового стерилизатора.

1.1.11. Кровезаменители и консервирующие растворы, подвергающиеся стерилизации паром под давлением, отбирают в количестве не менее 3-х образцов из различных мест парового стерилизатора.

1.1.12. Кровезаменители, подвергающиеся стерилизующей фильтрации и розливу, отбирают на контроль по одному флакону, в начале, середине и конце розлива.

1.2. Отбор образцов отделом технического контроля

В отдел технического контроля предъявляют готовую серию препарата. За одну серию препарата крови, кровезаменителей, консервирующих растворов, полимерных контейнеров принимают:

а) для жидких препаратов - количество продукции, подвергающейся стерилизующей фильтрации и розливу из одной емкости в течение не более одного дня;

б) для сухих препаратов - количество бутылок, флаконов и ампул с препаратом, высушенных в одном аппарате за один цикл сушки;

в) для продукции, подвергавшейся стерилизации паром под давлением - количество бутылок, ампул и др. с препаратом, полимерных контейнеров простерилизованных в одном паровом стерилизаторе.

1.2.1. Образцы готовой продукции отбирают для контроля от каждой серии в количествах, зависящих от вида стерилизации и числа единиц (ампул, флаконов и т.д.) в серии. В случае, если продукцию стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11+/-0,02 МПа (1,1+/-0,2 кгс/см) и температуре (+121+/-1) °С, образец состоит из 10 единиц. При других видах стерилизации минимальное количество образцов для анализа определяют по формуле

,

где - число единиц в образце, а - число единиц в исследуемой серии препарата, при этом должно быть не менее 3-х и не более 40.

Кроме образцов, направленных непосредственно на анализ, отбирают также дубликаты в тройном количестве, которые используются в случае необходимости для повторного контроля.

При отсутствии роста в первичных посевах дубликаты, предназначенные для повторного контроля, подлежат реализации.

При контроле стерильности препаратов крови, если серия включает в себя менее 100 бутылок, флаконов, ампул и др., количество контролируемых образцов должно быть не менее 2, при 150 - 3, при 250 - 4, при 300 - 5, при 500 и более - не менее 10. Количество образцов растворов и гемоконсервантов, отбираемое ОТК для контроля, может соответствовать тем количествам, которые предусмотрены для препаратов крови.

Примечание: При необходимости, с учетом особенностей технологии изготовления отдельных видов препаратов и особенностей фасовки, в соответствующей технологической документации могут быть регламентированы дополнительные требования в отношении необходимого количества контролируемых емкостей, обеспечивающих надежность контроля стерильности.

Оставшуюся продукцию после посева на стерильность (кровь, протеин, альбумин, плазмы, аминокровин и т.д.) передают в отдел фракционирования или в любое другое подразделение СПК для последующей переработки.

1.2.2. При проведении предварительного и арбитражного Государственного контроля направляется по 2 бутылки от серии; флаконов, ампул и др. - не менее 4 от серии.

1.2.3. При проведении последующего Государственного контроля направляется по 1 бутылке от серии; флаконов, ампул и др. - не менее 2 от серии.

1.2.4. Все образцы, идущие на контроль стерильности, сопровождаются специальным направлением (форма N 205/у).

2. Техника проведения контроля стерильности

2.1. В предбоксе бутылки, ампулы, флаконы, полимерные контейнеры с исследуемыми препаратами проверяют визуально на целостность укупорки и затем обрабатывают 3% раствором перекиси водорода или 70% спиртом.

При поступлении изделий в матерчатой или бумажной упаковке наружный слой снимают в предбоксе и изделие во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.

2.2. В предбоксе сотрудники лаборатории тщательно моют руки с мылом, вытирают их стерильным полотенцем, надевают стерильные халаты, шапочки или косынки, четырехслойные марлевые маски, а также тапочки или бахилы.

2.3. Перед началом работы в боксе руки обрабатывают 70% спиртом. Для работы используют простерилизованные инструменты, которые во время работы находятся в емкостях с 70% спиртом.

2.4. Перед посевом жидких препаратов содержимое ампул или бутылок необходимо встряхивать, т.к. микробы - контаминанты могут осесть на дно. Перед вскрытием концы ампул или горлышки бутылок обжигают над пламенем горелки.

Образцы сухих препаратов предварительно растворяют тем стерильным растворителем и в том же объеме, которые указаны на этикетке. Препараты в бутылках, флаконах, ампулах без этикеток контролю на стерильность не подлежат.

2.5. Посев каждого образца препарата производят в толщу питательной среды отдельной стерильной пипеткой без выдувания при помощи груши или длинной резиновой трубки, на конце которой имеется стеклянный мундштук с ватной пробкой. Перед посевом пипетку проводят через пламя горелки без прокаливания. Использованные пипетки помещают в емкости с дезинфицирующим раствором (3% раствор перекиси водорода или в 3% раствор хлорамина) и оставляют на 18-24 часов, после чего производят их дальнейшую обработку.

Примечание: 1. Запрещается прокаливать концы ампул и пастеровские пипетки в пламени горелки.

2. Запрещается производить посев пипеткой ртом, без груши или резиновой трубки со стеклянным мундштуком.

2.6. Для контроля стерильности МИБП применяют только тиогликолевую среду. Для контроля стерильности кровезаменителей и консервирующих растворов, растворов глюкозы 5 и 40% раствора, натрия хлорида изотонического 0,9%, буферных растворов - тиогликолевую среду и жидкую среду Сабуро. При этом используют метод прямого посева в питательную среду или метод мембранной фильтрации.

При испытании МИБП посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от +20° до +25 °С и от +30° до +35 °С.

При испытании кровезаменителей и консервирующих растворов посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от +30° до +35 °С, а в среде Сабуро - от +20° до +25 °С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 суток.

2.7. Исследуемый на стерильность препарат из бутылки, ампулы и др. засевают стерильной пастеровской пипеткой приблизительно (но не менее чем) по 1 мл в 2 пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды.

2.8. При посеве образцов крови и компонентов, заготовленных в полимерные контейнеры, трубку контейнера пережимают зажимом выше узла и отрезают стерильными ножницами между узлом и зажимом. Обрезанный конец трубки быстро проводят через пламя, ослабляют зажим и надавливанием на контейнер, расположенный вертикально основанием вверх, свернув свободную от крови или компонента часть контейнера, вытесняют необходимое количество посевного материала (не менее чем по 1 мл) в пробирки с питательной средой. После посева контейнер вновь герметизируют завязыванием двух узлов на трубке.

2.9. Посевы образцов консервированной крови, эритроцитной массы, эритроцитной взвеси, нативной плазмы, плазмы нативной концентрированной, нативной гипериммунной плазмы, фибринолизной крови и костного мозга выдерживают 2 суток при соответствующих температурах, затем производят пересев по 0,5 мл из каждой пробирки в другие 2 пробирки, содержащие по 10 мл тиогликолевой среды. Пересевы выдерживают при тех же температурах, что и пробирки, на которых был произведен высев. Результаты регистрируют через 72 часа после первичного посева.

2.10. При контроле образцов препаратов, не вызывающих помутнение питательной среды (протеин, растворы альбумина 5, 10, 20%, препараты иммуноглобулинов, растворители для сухих препаратов, кровезаменители, консервирующие растворы и др.), посевы выдерживают в течение 14 суток при указанных выше температурах, после чего производят учет результатов.

2.11. При контроле образцов препаратов, вызывающих помутнение питательной среды (тромбин, фибриноген, фибринолизин, полибиолин, плазма сухая; в том числе гипериммунная сухая) через 5-7 суток из каждой пробирки производят пересев по 0,5 мл в другие пробирки с 10 мл тиогликолевой среды, которые выдерживают после пересева соответственно при тех же температурах. Общий период инкубации первичного посева и пересева составляет 14 суток.

Примечание: Пробирки, на которых произведен пересев препаратов, сохраняют до окончания контроля стерильности.

2.12. Образцы (кусочки) гемостатической губки, фибринной изогенной пленки, консервированной ткани, биологический антисептический тампон засевают в 2 пробирки с 20 мл тиогликолевой среды. Посевы выдерживают при температуре +30-35 °С и +20-25 °С 14 суток.

2.13. Стерильность растворителя, используемого для растворения сухих препаратов и приготовления буферных растворов, проверяют путем посева по 1 мл в 2 пробирки, содержащие по 20 мл тиогликолевой среды. Если при посеве сухих препаратов используют несколько бутылок растворителя, стерильность каждой проверяют аналогичным способом.

2.14. Если объем содержимого одной единицы продукции превышает 100 мл, то, согласно ВФС 42-1844-88* (испытание на стерильность) предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.

________________

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Метод мембранной фильтрации. Испытание продукции на стерильность проводят с использованием фильтрационной установки, включающей фильтродержатель, соединенный с колбой-приемником. Фильтродержатель состоит из воронки с крышкой и основания из пористой пластины, на которую помещают мембрану. Используют мембраны с размером пор 0,45+/-0,02 мкм, диаметром около 47 мм. Испытания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см рт.ст.) при скорости вытекания воды 55-75 мл в мин. Допускается использование аппарата, представляющего собой стерильную замкнутую систему и работающего также по принципу фильтрации растворов.

2.15. Фильтровальную установку в собранном виде стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11+/-0,02 МПа (1,1+/-0,2 кгс/см) и температуре (+121+/-1) °С в течение 20 мин (температура и время критические). Стерилизацию можно осуществлять любым другим способом, обеспечивающим сохранность рабочих характеристик мембраны, а также стерильность мембраны и всей установки (ионизирующее излучение, окись этилена и т.п.).

2.16. Фильтрование отобранных образцов проводят в асептических условиях. Испытуемый раствор пропускают с помощью вакуума через одну или несколько мембран.

2.17. После фильтрования мембраны извлекают, разрезают стерильными ножницами на две равные части, каждую из которых помещают в отдельную колбу с 100 мл тиогликолевой среды. Питательные среды с помещенными в них фильтрами выдерживают при температуре от +30 до +35 °С и от +20 до +25 °С в течение 7 суток при ежедневном просмотре.

2.18. Для контроля стерильности препаратов, выпускаемых в виде порошков, лиофилизированных препаратов и пр. содержимое каждой емкости предварительно растворяют в стерильном растворителе. Приготовленный раствор немедленно фильтруют. После отмывания фильтра, как указано выше, каждую половину его помещают в колбы с тиогликолевой средой и выдерживают при +30-35 °С и +20-25 °С.

2.19. При испытании продукции, разлитой в емкости большого объема, через фильтры пропускают содержимое 5-10 емкостей, если объем каждой емкости составляет от 100 до 500 мл. При наличии в емкости более 500 мл раствора стерильность испытывают по 500 мл содержимого каждой из 5-10 емкостей на 2-3 мембранах.

2.20. При испытании препаратов, представляющих собой вязкую жидкость или медленно фильтрующиеся суспензии, необходимо предварительно добавить растворитель, указанный в частной статье, для увеличения скорости фильтрации.

Для контроля стерильности условий, в которых проводят испытания, необходимо фильтровать растворитель без испытуемого препарата с последующим воспроизведением всех вышеописанных операций.

3. Учет и интерпретация результатов испытания на стерильность