ГОСТ 33061-2014

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ, ПРЕДСТАВЛЯЮЩЕЙ ОПАСНОСТЬ ДЛЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Наземные растения: Тест на всхожесть семян и развитие проростков

Testing of chemicals of environmental hazard. Terrestrial Plant Test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test

МКС 71.040.50

Дата введения 2015-08-01

     

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного аутентичного перевода на русский язык руководящего документа, указанного в пункте 4.

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 октября 2014 г. N 71-П)

За принятие проголосовали:

4 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD, No 208:2008* Terrestrial Plant Test: Seedling Emergence and Seedling Growth Test (ОЭСР, Тест N 208:2006 Наземные растения: тест на всхожесть семян и развитие проростков)

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Перевод с английского языка (en).

Степень соответствия - идентичная (IDT)

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 25 ноября 2014 г. N 1751-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33061-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2015 г.

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Введение

Руководства по тестированию химикатов периодически, по мере появления результатов новых научных исследований, пересматриваются в контексте их применимости в сфере законодательно-нормативного регулирования. Данное дополненное руководство разработано в целях оценки возможного влияния химических веществ на всхожесть семян и рост растений. Оно не предусматривает исследований возможных отдаленных (хронических) воздействий и воздействий на репродуктивное развитие (образование семян, цветков, созревание плодов). Для выбора оптимального метода тестирования требуется обязательный учет условий прорастания семян растений и свойств тестируемого вещества (например, при изучении влияния металлов и металлсодержащих компонентов необходимо учитывать влияние рН и ассоциированных противоионов [1]).

Руководство не применимо для изучения влияния на растения химических веществ в форме паров/газов. Руководство рекомендуется для тестирования влияния традиционных химических веществ, биоцидов, средств защиты урожая (также именуемых средствами защиты растений или пестицидами). Оно разработано на основе существующих методик [2-7]. Соответствующие данные содержатся в работах [8-10]. Определения терминов приведены в разделе "Термины и определения".

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод оценки влияния химических веществ на всхожесть семян наземных растений и развитие проростков.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 действующий ингредиент (или действующее вещество) [active ingredient (or active substance]: Вещество, предназначенное для оказания специфических биологических воздействий (например, контроля вредителей, заболеваемости растений, сорных растений на обрабатываемой территории), также может иметь наименование технический продукт действующего вещества, активное вещество.

2.2 средства защиты сельскохозяйственных культур (СЗСХК) или средства защиты растений (СЗР) или пестициды (crop protection products (CPPs) or plant protection product (PPPs) or pesticides): Вещества, обладающие специфической (избирательной) биологической активностью, целенаправленно используемые для защиты урожая от вредных организмов (грибных болезней, насекомых и сорняков).

2.3 ЕСх - эффективная концентрация (х% действия концентрации) или ERx - эффективная доза (х% действия дозы) (ЕСх х% effect concentration or ERx x% effect rate): Концентрация/доза вещества, вызывающая неблагоприятные изменения измеряемого к концу опыта показателя в х% случаев относительно контрольной группы (например: в 25% или в 50% случаев наблюдается уменьшение всхожести, веса урожая, числа выживших растений, возрастание доли дефектов развития и иных признаков повреждения). Концентрация вещества, вызывающая такое действие, выражают величинами () или (), соответственно).

2.4 всхожесть (прорастание) (emergence): Появление колеоптиля или котиледона над поверхностью почвы.

2.5 препарат (formulation): Коммерческий продукт, содержащий действующее вещество (действующий ингредиент), называемый также продуктом конечного использования.

_______________

Продукт конечного использования - представленный на рынке промышленный продукт, содержащий действующее вещество

2.6 наименьшая концентрация наблюдаемого влияния (LOEC) (lowest observed effect concentration (LOEC)): Минимальная концентрация, при которой проявляется эффект воздействия тестируемого вещества. В данном случае, LOEC соответствует величине воздействия (концентрации вещества), при которой проявляется статистически значимое (с вероятностью 0,5) изменение показателя состояния растения относительно контрольной группы в течение периода наблюдений; при этом данная величина выше величины NOEC - недействующей концентрации.

2.7 нецелевые виды растений (non-target plants): Растения, произрастающие вне территории выращивания растений, являющихся объектом обработки. Для сельскохозяйственных растений - обычно это растения, растущие вне обрабатываемых площадей, занятых под сельскохозяйственное производство.

2.8 NOEC (недействующая концентрация) (NOEC (no observed effect concentration): Максимальная концентрация испытуемого вещества, при которой не проявляется его воздействие на растения. В данном случае - это концентрация, при которой на протяжении периода наблюдений не выявляются какие-либо статистически значимые (с вероятностью 0,05) эффекты воздействия на обрабатываемые растения относительно контрольной группы.

2.9 фитотоксичность (phytotoxicity): Неблагоприятные отклонения (измеренные или оцененные визуально) от нормального вида и роста растений, возникшие как ответная реакция на применение действующего вещества.

2.10 повторность (replicate): Единица наблюдения в эксперименте, представляющая собой контрольную и/или обработанную группу растений. В данном случае - повторностью является вегетационный сосуд.

2.11 визуальная оценка (visual assessment): Ранжирование визуально наблюдаемых признаков нарушения развития растений - густоты посева, жизненного статуса, уродств, хлороза, некроза, показателей общего внешнего вида относительно контрольной группы.

     3 Сущность теста

3.1 При испытаниях исследуют эффекты влияния химического вещества на всхожесть и ранние стадии развития высших растений, являющиеся следствием внесения тестируемого вещества в почву (или иной субстрат для выращивания растений). Семена растений размещаются в почву, обработанную химическим веществом, после чего возможные воздействия анализируют в течение 14-21 дней после прорастания 50% семян в контрольной группе. Конечными показателями являются: визуально проводимая оценка всхожести, сухая (мокрая) масса растений, в некоторых случаях - длина проростков и иные визуально регистрируемые негативные изменения в разных частях растений. Данные показатели сравнивают с показателями состояния растений в контрольной группе.

3.2 В зависимости от предполагаемого пути воздействия тестируемое химическое вещество заделывают в почву (искусственный субстрат) или вносят ее (его) на поверхность. Заделку производят путем внесения компонента в большой объем почвы, после чего почву размещают в сосуды, в которые высевают семяна. Поверхностное внесение осуществляют в почву, помещенную в вегетационные сосуды с уже посеянными семенами. Каждую испытуемую группу сосудов (контрольные и обработанные почвы с посеянными семенами) затем помещают в соответствующие, подобранные для опыта, одинаковые условия для наблюдений за прорастанием/ростом растений.

3.3 Опыты (в зависимости от задачи исследования) могут проводиться с целью определения кривой зависимости доза-эффект или (при изучении воздействия одной концентрации/дозы внесения вещества) для определения возможного предельного содержания. Если результаты тестирования одной концентрации/дозы внесения вещества превышают уровень токсичности (обнаруживаются воздействия, превышающие некоторый х% уровень), дополнительно ставят диапазонный тест с целью установления верхней и нижней границ токсичности, и далее - опыт с рядом концентраций для построения кривой доза-эффект. Применяя подходящий метод статистического анализа по наиболее чувствительному параметру (параметрам) состояния растений, определяют эффективную концентрацию или эффективную дозу (норма внесения) (например, , , , ). Также определяют недействующую концентрацию (NOEC) и минимальную действующую концентрацию (LOEC).

     4 Сведения о тестируемом веществе

Для определения путей воздействия вещества на растения и выбора условий проведения экспериментов необходима следующая информация о тестируемом химическом веществе: структурная формула, чистота, растворимость в воде, растворимость в органических растворителях, коэффициент распределения в системе октанол-вода, сорбционное поведение в почве, давление паров, устойчивость в воде и на свету, способность к биодеградации.

     5 Достоверность теста

Для достоверности теста необходимо соблюдение следующих условий в контрольных группах растений:

- прорастание растений должно составлять не менее 70%;

- проростки не должны иметь внешних проявлений фитотоксичности (например, хлороз, некроз, завядание, деформации листьев и стеблей), кроме нормальных особенностей варьирования роста и морфологии, типичных для соответствующих видов растений;

- средняя выживаемость проросших растений в контрольной группе в течение всего опыта не должна быть ниже 90%;

- условия опыта, состав и количество грунта (субстрата) для каждого вида растений должны быть идентичными.

     6 Вещество сравнения

Для контроля постоянства условий, особенностей проведения опытов и ответной реакции тестируемых растений должна регулярно проводиться проверка с использованием вещества сравнения. Также для оценки режима проведения опытов (поведения тест-систем) и в целях внутрилабораторного контроля качества экспериментов могут быть использованы архивные (многолетние) данные по биомассе и показателям роста растений, полученные ранее в аналогичных опытах в соответствующих лабораториях.

     7 Описание теста

7.1 Естественная почва - искусственный субстрат

7.1.1 Растения могут выращиваться в вегетационных сосудах с использованием легкого суглинка, супеси или опесчаненного суглинка, содержащих до 1,5% органического углерода (примерно 3% органического вещества). Могут также использоваться имеющиеся в продаже почвогрунты или синтетические почвосмеси, содержащие до 1,5% органического углерода. Глинистые почвы не рекомендуются, если тестируемое вещество имеет высокое сродство к глинам. Почву просеивают через сито с диаметром отверстий 2 мм для гомогенизации и удаления крупных частиц. В отчетах должны быть представлены следующие данные о почве: тип, текстура, содержание органического углерода, рН, содержание солей (по электропроводности). Название почвы приводят по стандартной классификации [11]. Допустима пастеризация или тепловая обработка почвы для снижения влияния почвенных патогенных организмов.

7.1.2 Использование природной почвы может затруднить интерпретацию результатов опыта и увеличивать разброс показателей из-за варьирования ее физико-химических свойств и особенностей популяций микроорганизмов. Эти свойства, в свою очередь, влияют на водоудерживающие характеристики почвы, емкость химического связывания веществ, условия аэрации, содержание питательных веществ и тяжелых металлов. Помимо физических свойств почв, также может варьироваться их рН, окислительно-восстановительный потенциал, что влияет на биодоступность испытуемых веществ [12]-[14].

7.1.3 Искусственные субстраты, как правило, не используют при тестировании веществ, применяемых как средства защиты сельскохозяйственных культур, но их можно использовать при тестировании традиционных химических веществ или, если они специально разработаны для исключения влияния вариабельности, возникающей при использовании природных почв, в целях увеличения сопоставимости результатов. Эти субстраты должны состоять из инертных материалов, не вступающих во взаимодействие с тестируемым веществом, растворителем или ими обоими. Такими материалами могут быть кварцевый песок, промытый кислотой, минеральная вата или стеклянные шарики (0,35-0,85 мм в диаметре); они минимально сорбируют химические вещества [15], что обеспечивает максимальную доступность растениям веществ, поступающих через корневую систему. Неподходящими для опытов материалами являются вермикулит, перлит и иные адсорбирующие вещества. Растения должны быть обеспечены питательными веществами, чтобы избежать возможных негативных воздействий, связанных с их дефицитом; там, где это возможно, отсутствие такого дефицита должно быть подтверждено результатами химического анализа почв или визуальной оценкой состояния растений контрольной группы.