ГОСТ 32644-2014

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЯ ПО ВОЗДЕЙСТВИЮ ХИМИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА

Острая пероральная токсичность - метод определения класса острой токсичности

OECD guidelines for the testing of chemicals. Acute oral toxicity - fcute toxic class method

МКС 13.020.01

     Дата введения 2015-06-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ"); Техническим комитетом по стандартизации N 339 "Безопасность сырья, материалов и веществ" Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 28 марта 2014 г. N 65-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2014 г. N 1214-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32644-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу OECD Test N 423:2001* "Острая пероральная токсичность - метод определения класса острой токсичности" ("Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 2019 г.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
     
     В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Руководства ОЭСР по испытаниям химических веществ периодически пересматриваются с учетом научного прогресса или изменений методов оценивания. Первоначальное Руководство 423 было принято в марте 1996 года, как альтернатива обычному тестированию на острую токсичность, описанному в Руководстве 401. Основанное на рекомендациях нескольких совещаний экспертов, исправление считается своевременным, так как: а) была достигнута международная договоренность по согласованным пороговым значениям для классификации химических веществ, которые отличаются от тех, что заявлены в версии Руководства 1996 года; и б) в настоящее время считается достаточным тестирование на представителях одного пола (обычно самок).

     1 Область применения

Метод острой токсичности [2], изложенный в данном руководстве, - это поэтапная процедура с использованием трех животных одного пола на каждом этапе. В зависимости от смертности и/или предсмертного состояния животных для того, чтобы сделать заключение об острой токсичности исследуемого вещества, в среднем необходимо 2-4 этапа. Эта процедура воспроизводима, использует очень небольшое количество животных и дает возможность оценить вещества таким же образом, что и другие методы тестирования острой токсичности (Руководства по тестированию 420 и 425). Метод определения класса острой токсичности основан на биометрических оценках [3, 4, 5, 6] с фиксированными дозами, которые распределены по времени приема так, чтобы было возможно оценить вещество по степени опасности и систематизировать результаты. Метод, принятый в 1996 году, был в значительной степени подтвержден in vivo, в отличие от данных по , полученных из литературы, как в масштабах страны [7], так и в международном масштабе [8].

Руководство по выбору наиболее подходящего метода исследования для данной цели можно найти в документе Руководства по тестированию острой пероральной токсичности [9]. Этот документ руководства также содержит дополнительную информацию по проведению и толкованию Руководства по тестированию 423.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 доза (dose): Количество вводимого тестируемого вещества. Доза выражается как отношение массы тестируемого вещества к единице массы подопытного животного (например, мг/кг).

2.2 острая оральная токсичность (acute oral toxicity): Неблагоприятные явления, которые возникают после приема внутрь однократной дозы вещества или нескольких доз в течение 24 часов.

2.3 отложенная смерть (delayed death): Животное не умерло или не находится при смерти в течение 48 часов, но умирает позже, во время 14-дневного периода наблюдения.

2.4 предельная доза (limit dose): Доза, являющаяся самой большой при тестировании (2000 или 5000 мг/кг).

2.5 прогнозируемая смерть (impending death): Определенные клинические признаки, свидетельствующие о смерти в будущем, до запланированного конца эксперимента, например: неспособность добраться до воды или пищи (см. Методический документ по гуманности конечных показателей [10] для более подробной информации).

2.6 СГС (GHS): Согласованная на глобальном уровне система классификации опасности и маркировки химической продукции. Совместная деятельность ОЭСР (Организация экономического сотрудничества и развития), Комитета экспертов ООН по перевозке опасных грузов (физико-химические свойства) и МОТ (информирование об использовании опасных материалов), координируемая Межорганизационной программой по рациональному регулированию химических веществ (МПРРХВ).

2.7 угроза смерти (predictable death): Предсмертное состояние или смерть до следующей запланированной даты наблюдения. У грызунов указывающими на это знаками являются конвульсии, боковое положение, лежачее положение и тремор (см. Методический документ по гуманности конечных показателей [10] для более подробной информации).

2.8 умирающий (moribund status): Находящийся в состоянии смерти или неспособности выжить даже при лечении (см. Методический документ по гуманности конечных показателей [10] для более подробной информации).

2.9 (средняя летальная пероральная доза): Статистически определенная однократная доза вещества, которая может стать причиной смерти 50% животных при введении пероральным путем. Значение выражается в отношении массы тестируемого вещества к единице массы подопытного животного (мг/кг).

     3 Принцип тестирования

Принцип исследования состоит в том, что, основываясь на поэтапной процедуре с использованием минимального количества животных на каждом этапе, появляется достаточное количество информации по острой токсичности исследуемого вещества для того, чтобы эту информацию классифицировать. Вещество вводится перорально каждой группе подопытных животных в одной из заданных доз. Вещество тестируется с помощью поэтапной процедуры, с использованием на каждом этапе трех животных одного пола (обычно самок). Отсутствие или наличие связанной с веществом смертности животных, дозируемых на одном этапе, будет определять следующий этап, т.е.:

- нет необходимости в дальнейшем исследовании,

- дозирование трех дополнительных животных такой же дозой,

- дозирование трех дополнительных животных следующим, по возрастающей или по нисходящей, уровнем дозы.

Детали процедуры исследования описаны в приложении А. Методика позволит сделать вывод относительно классификации исследуемого вещества с отнесением его к одному из разрядов классов токсичности, определяемых фиксированным пороговых значений.

Не нужно вводить тестируемые вещества в дозах, про которые известно, что они могут вызывать явную боль или недомогание из-за своего разъедающего или тяжелого раздражающего действия. Агонизирующие животные или животные, явно испытывающие боль или демонстрирующие признаки тяжелого и длительного недомогания, должны быть гуманным образом умерщвлены. Их следует учитывать в интерпретации результатов тестирования так же, как и животных, умерших во время исследования. Критерии для принятия решения об умерщвлении агонизирующих или испытывающих тяжелые боли животных, а также руководство по распознаванию прогнозируемой или неминуемой смерти отдельно рассматриваются в документе Руководства [10].

Метод использует заранее установленные дозы, и его результаты позволяют ранжировать и классифицировать вещество согласно Согласованной на глобальном уровне системе классификации опасности и маркировки химической продукции, вызывающей острую токсичность [11].

В принципе метод не предназначен для подсчета точной , но позволяет определить заданный интервал воздействия, когда предполагается летальный исход, так как смертность относительно количества животных остается главным ожидаемым результатом такого исследования.

Исследовательская лаборатория должна изучить всю имеющуюся информацию по тестируемому веществу до начала исследования. Такая информация будет включать отличительные особенности и химическую структуру вещества; его физико-химические свойства; результаты любых in vitro и in vivo исследований токсичности вещества; токсикологические данные по структурно родственным веществам; предполагаемое использование вещества. Эта информация является необходимой, чтобы убедить все заинтересованные стороны относительно того, что исследование имеет важное значение для защиты здоровья человека, а также она поможет в выборе наиболее подходящей начальной дозы.

     4 Описание метода

4.1 Животные
     

    4.1.1 Выбор видов животных

Предпочтительным видом грызунов являются крысы, хотя могут использоваться и другие виды грызунов. Как правило, используются самки. Это объясняется тем, что обзоры литературы по стандартным исследованиям демонстрируют, что, хотя существует лишь небольшое различие в восприимчивости между полами, в тех случаях, когда такое различие наблюдается, самки, как правило, несколько более восприимчивы [12]. Тем не менее, если информация о токсикологических или токсикокинетических свойствах структурно родственных веществ показывает, что самцы, возможно, должны быть более восприимчивы, тогда следует использовать их. Если исследование проводится на самцах, это необходимо должным образом обосновать.

Следует использовать молодых здоровых половозрелых животных лабораторных видов. Самки не должны быть беременными или рожавшими. Каждое животное к началу его дозирования должно быть в возрасте от 8 до 12 недель, и ее* масса тела должна попадать в интервал +20% средней массы ранее дозируемых животных.

_______________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

4.1.2 Условия содержания и кормления

Температура в комнатах подопытных животных должна быть 22°С (±3°С). Хотя относительная влажность воздуха должна быть как минимум 30% и желательно не превышать 70% (если только не проводится уборка помещения), оптимальная влажность - 50-60%. Свет должен быть искусственным с последовательностью: 12 часов - свет, 12 часов - темнота. Для кормления могут использоваться традиционные лабораторные диеты с неограниченным количеством питьевой воды. Животных группировать по клеткам по дозам, но количество животных в клетке не должно мешать свободному наблюдению за каждым животным.

4.1.3 Подготовка животных

Животные выбираются случайным образом, маркируются индивидуальными идентификаторами и содержатся в своих клетках как минимум в течение 5 дней до начала дозирования, чтобы дать им возможность адаптироваться в лабораторных условиях.

4.2 Подготовка доз вещества

Как правило, исследуемое вещество должно вводиться в постоянном объеме в диапазоне доз, чтобы исследовать изменение концентрации дозируемого препарата. Когда, однако, исследуется жидкость как конечный продукт или смесь, для последующей оценки опасности этого вещества более актуальным может быть использование неразбавленного исследуемого вещества, т.е. в постоянной концентрации, и это является требованием некоторых регулирующих органов. В любом случае, объем максимальной дозы для введения превышать не следует. Максимальный объем жидкости, который может быть введен за один раз, зависит от размера подопытного животного. У грызунов объем в норме не должен превышать 1 мл/100 г массы тела; однако в случае с водными растворами можно рассматривать и 2 мл/100 г. Что касается технологии приготовления дозируемого препарата, рекомендуется, если возможно, использование водных растворов/суспензий/эмульсий; далее, по предпочтительности, следуют растворы/суспензии/эмульсии в масле (например, кукурузное) и затем возможны растворы в других средах. Для сред, отличных от воды, должны быть известны их токсикологические свойства. Дозы должны готовиться непосредственно перед введением, за исключением случаев, когда известна стабильность препарата в течение периода, когда он будет использован, и доказана его приемлемость.

4.3 Процедура проведения испытания
     

    4.3.1 Количество и пол животных

На каждом этапе используют трех животных. Уровень дозы, используемой как начальная доза, выбирается из одного из четырех фиксированных уровней: 5, 50, 300 и 2000 мг/кг массы тела. Уровень начальной дозы должен быть таким, чтобы с наибольшей вероятностью вызвать смерть некоторых из дозируемых животных. Блок-схема приложения А описывает процедуру, которой необходимо следовать для каждой из начальных доз.