ГОСТ Р 56236-2014 (ИСО 6341:2012) Вода. Определение токсичности по выживаемости пресноводных ракообразных Daphnia magna Straus

Приложение В
(обязательное)

          
Методы культивирования тест-организмов

B.1 Условия культивирования тест-организмов. Общие требования.

B.1.1 Исходный материал для культивирования тест-организмов Daphnia magna Straus получают в лабораториях, занимающихся тестированием, имеющих культуру требуемой видовой принадлежности. Чувствительность культур к модельному токсиканту должна соответствовать установленному в настоящем стандарте диапазону ЭК за 24 ч (методы А и B).

Тест-организмы культивируют и содержат в климатостате, в инкубаторе или в помещении с регулируемой температурой (20±2)°С.

При этом обеспечивают естественное или искусственное освещение так, чтобы соблюдались следующие периоды выдержки: 16 ч - воздействие света при освещенности 500-1000 лк, 8 ч - без воздействия света (в темноте).

Тест-организмы Daphnia magna Straus необходимо защищать от воздействия прямого солнечного света.

Тест-организмы и культивационная вода, в которой проводят их культивирование, должны содержаться в емкостях только из стекла или полимерного материала, изготовленного без использования пластификатора.

Примечания

1 Тест-организмы - пресноводные ракообразные Daphnia magna Straus: имеют широкое географическое распространение, обладают коротким жизненным циклом и требуют минимум пространства и оборудования для культивирования и проведения тестирования. Тест-организмы можно культивировать постоянно в лабораторных условиях.

2 Развитие ракообразных Daphnia magna Straus проходит через три стадии: новорожденный организм, молодь и взрослые особи. При температуре 20°С развитие только что вылупившихся новорожденных организмов до взрослой стадии проходит через 7 сут. Новорожденные дафнии выпускаются непосредственно из яйцевого мешка женской особью Daphnia magna Straus в течение 1-2 сут.

В.1.2 Вода для культивирования тест-организмов по 5.3.2 и 5.2 настоящего стандарта (далее - культивационная вода) должна соответствовать условиям тестирования [см. 5.3.2 и E.1 (приложение E)].

В.1.3 Емкости, применяемые для культивирования тест-организмов, должны быть оснащены свободными или перфорированными крышками, чтобы уменьшить испарение, но обеспечить газообмен.

В.1.4 Емкости тщательно моют при каждой замене культивационной воды.

В.1.5 В качестве корма используют культуры пресноводных одноклеточных водорослей Scenedesmus qvadricauda или Chlorella vulgaris (десятисуточную).

В.2 Условия подготовки к тестированию Daphnia magna Straus

В.2.1 Оборудование и процедура получения молоди

Для тестирования используют околосуточных Daphnia magna Straus (синхронизированная культура), которых получают в лаборатории следующим способом:

- в стакан вместимостью 500 см с культивационной водой из емкости с маточной культурой помещают 40 шт. взрослых особей Daphnia magna Straus, кормят по В.2.3 и выдерживают 1-2 сут.

Примечание - Культивационную воду готовят по 5.3.2 или приложению Е;

- через одни сутки новорожденные организмы, по мере их выклева в течение суток, отбирают трубочкой и помещают в чистый стакан с культивационной водой;

- затем околосуточную молодь (синхронизированную культуру) используют в эксперименте.

В.2.2 Регулирование плотности популяции

Как правило, нет необходимости регулировать плотность популяции тест-организмов при подготовке молоди к тестированию.

В течение 1-8 ч накопившиеся новорожденные тест-организмы переносят пипеткой в отдельный сосуд с культивационной водой и используют для тестирования.

Предварительную адаптацию к культивационной воде неонатов Daphnia magna Straus не проводят.

В.2.3 Кормление

Околосуточную молодь Daphnia magna Straus при тестировании не кормят.

В.3 Условия культивирования маточной культуры Daphnia magna Straus по методу А