ГОСТ EN 12821-2014 Продукты пищевые. Определение содержания холекальциферола (витамина D(3)) и эргокальциферола (витамина D(2)) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
4 Реактивы
4.1 Общие положения
Если не указано иное, то при анализе используют только реактивы гарантированной чистоты и воду, по крайней мере, степени чистоты 1 по EN ISO 3696.
4.2 Метанол.
4.3 Этанол абсолютный, объемная доля (C
H
OH) =100%.
4.4 Этанол, (C
H
OH)=96%.
4.5 Сульфат натрия, безводный.
4.6 Растворы гидроксида калия для омыления - водный раствор массовой концентрации (КОН)=50 г/100 см
или 60 г/100 см
или водно-этанольный раствор
(КОН)=28 г/100 см
при объемном соотношении этанола и воды 9:1.
4.7 Антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота (АК), аскорбат натрия, пирогаллол, сульфид натрия (NaS) или бутилокситолуол (ВНТ).
4.8 Растворители и экстрагенты, например диэтиловый эфир (не содержащий перекисей), дихлорметан, петролейный эфир, н-гексан, этилацетат или подходящая их смесь.
4.9 Подвижные фазы для ВЭЖХ
4.9.1 Варианты подвижных фаз, пригодных для нормально-фазовой полупрепаративной ВЭЖХ
Примерами подходящих подвижных фаз (состав в объемных долях) для полупрепаративной ВЭЖХ являются смеси:
- н-гексана и пропанола-2 (98+2), (99+1) или (95+5);
- н-гексана и изоамилового спирта (99+1);
- н-гексана, пропанола-2 и тетрагидрофурана (98+1+1);
- изооктана и изобутанола (99+1);
- н-гептана и пропанола-2 (97+3).
4.9.2 Варианты подвижных фаз, пригодных для обращенно-фазовой аналитической ВЭЖХ
Примерами подходящих подвижных фаз (состав в объемных долях) для обращенно-фазовой аналитической ВЭЖХ являются:
- метанол;
- смеси метанола и воды (95+5) или (93+7);
- смеси ацетонитрила и метанола (80+20), (90+10) или (70+30);
- смесь ацетонитрила, хлороформа и метанола (93+4+3).
4.10 Образцы сравнения
4.10.1 Образец сравнения эргокальциферола (витамин D), М(С
Н
O)=396,7 г/моль
В качестве образца сравнения витамина D следует использовать препарат максимально доступной степени чистоты с массовой долей основного вещества более 98%. Образец сравнения хранят в соответствии с инструкциями поставщика (при отсутствии света, обычно при температуре ниже 4°С).
4.10.2 Образец сравнения холикальциферола (витамин D), М(С
Н
O)=384,6 г/моль
В качестве образца сравнения витамина D следует использовать препарат максимально доступной степени чистоты с массовой долей основного вещества более 98%. Образец сравнения хранят в соответствии с инструкциями поставщика (при отсутствии света, обычно при температуре ниже 4°С).