Метод основан на выделении витаминов D и D из пробы путем ее омыления и экстракции витаминов подходящим растворителем с последующей очисткой экстракта с помощью полупрепаративной нормально-фазовой высокоэффективной хроматографии (далее - ВЭЖХ) и количественным определением витаминов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ.
При определении витамина D в качестве внутреннего стандарта используют витамин D. Если определению подлежит витамин D, то в качестве внутреннего стандарта используют витамин D.
Витамин D детектируют спектрофотометрическим методом в ультрафиолетовой области и идентифицируют пики по значениям времени удерживания и дополнительно по спектру поглощения в ультрафиолетовой области, если используется диодноматричный детектор. Количественный анализ проводят с применением внутреннего стандарта по результатам измерений значений высот или площадей пиков, см. [1]-[8].