ГОСТ 32834-2014 Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания антгельминтиков с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (с Поправками)
6.4 Построение градуировочной характеристики
6.4.1 Градуировочную характеристику строят при помощи матричной градуировки. Для этого проводят обработку заведомо "чистых" проб, приготовленных и проанализированных ранее, не содержащих антгельминтиков в соответствии с требованиями раздела 7, в зависимости от типа исследуемой матрицы.
6.4.2 Для получения градуировочных данных используют не менее трех уровней концентраций матричных градуировочных растворов. Определяемое в анализируемой пробе содержание антгельминтиков должно находиться в диапазоне концентраций градуировочной характеристики.
6.4.3 При установлении градуировочной характеристики в инжектор хроматографа вводят не менее двух раз по 20 мм матричных градуировочных растворов
(6.3.10) различных уровней концентраций в условиях, указанных в 6.5.
6.4.4 Для проверки приемлемости результатов измерений рассчитывают значение относительной повторяемости , %, параллельных определений для каждого градуировочного раствора - разности между результатами параллельных определений, отнесенные к их среднему значению по формуле
, (2)
где и
- параллельные определения при получении
-го результата для матричного градуировочного раствора, мкг/кг;
-среднеарифметическое значение
и
(
-й результат анализа), мкг/кг.
Значения (
=1, 2, ..) не должны превышать пределов повторяемости
установленных при
=0,95 и приведенных в таблице 1.
Таблица 1 - Пределы относительной повторяемости и показатель повторяемости для выбранных диапазонов измерений
Диапазон измерений содержания антгельминтиков, мкг/кг (нг/г) | Предел повторяемости | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), |
От 1,0 до 10,0 включ. | 25 | 9 |
Св. 10,0 " 100,0 " | 20 | 7 |
" 100,0 " 1000,0 " | 15 | 5 |
6.4.5 При помощи компьютерной системы обработки данных строят градуировочную характеристику зависимости концентрации от площади пика анализируемого соединения методом внутреннего стандарта. При построении градуировочной зависимости используют линейную или квадратическую функцию.
6.4.6 Вычисление площади пика проводят для каждого дочернего иона анализируемых соединений. Допускается проведение количественных измерений по одному, наиболее интенсивному, дочернему иону. Для подтверждения наличия антгельминтиков рассчитывают отношения площади пика двух дочерних ионов для каждого соединения в градуировочном растворе.
6.4.7 При построении градуировочной характеристики внутренние стандарты для антгельминтиков выбирают в соответствии с таблицей 2. Расчеты коэффициентов градуировочной характеристики выполняются системой обработки данных в автоматическом режиме.
Таблица 2 - Соответствие между анализируемыми соединениями и внутренними стандартами
Наименование антгельминтика | Наименование внутреннего стандарта антгельминтика |
Левамизол | Тетрамизол - D5 |
Пирантел | Тиабендазол - 13C6 |
Оксибендазола амин | Оксибендазола амин - D7 |
Гидроксимебендазол | Гидроксимебендазол - D3 |
Альбендазола сульфоксид | Альбендазола сульфоксид - D3 |
Камбендазол | Камбендазол - D7 |
Оксибендазол | Оксибендазол - D7 |
Альбендазола сульфон | Альбендазола сульфон - D3 |
Аминофлюбендазол | Метил-карбамат |
Оксфендазол | Оксфендазол - D3 |
Оксфендазола сульфон | Фенбендазола сульфон - D3 |
Парбендазол | Альбендазол - D3 |
Мебендазол | Мебендазол - D3 |
Флюбендазол | Флюбендазол - D3 |
Фенбендазол | Фенбендазол - D3 |
Празиквантел | Фебантел - D6 |
Клорсулон | Триклабендазол - D3 |
6.4.8 Время удерживания анализируемых веществ определяют при анализе градуировочных растворов. Значения абсолютного времени удерживания анализируемых соединений в предложенных хроматографических условиях приведены в таблицах 3 и 4.
Таблица 3 - Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электрораспыления с регистрацией положительных ионов
Наименование антгельминтика | Время удерживания, мин | Ион предшественник, m/z | Дочерние ионы, m/z* |
Левамизол | 12,6 | 205,2 | 178,1/123,2 |
Тетрамизол - D5* | 12,6 | 210,1 | 183,0 |
Альбендазола аминосульфон | 12,7 | 240,1 | 198,1/133,2 |
Пирантел | 12,9 | 207,1 | 150,2/136,2 |
Гидрокситиабендазол | 13,0 | 218,0 | 191/147,1 |
Тиабендазол | 13,4 | 202,1 | 175,1/131,2 |
Тиабендазол - 13C6* | 13,4 | 208,1 | 181,1 |
Морантел | 13,8 | 221,1 | 164,2/123,1 |
Аминомебендазол | 15,4 | 238,2 | 105,1/77,0 |
Оксибендазола амин | 15,5 | 192,2 | 150,2/108,1 |
Оксибендазола амин - D7* | 15,5 | 199,1 | 151,2 |
Гидроксимебендазол | 15,7 | 298,2 | 220,2/79,2 |
Гидроксимебендазол - D3* | 15,7 | 301,2 | 220,2 |
Аминофлюбендазол | 15,9 | 256,2 | 123,1/95,1 |
Альбендазола сульфоксид | 16,1 | 282,2 | 240,1/208,1 |
Альбендазола сульфоксид - D3* | 16,1 | 285,1 | 243,1 |
Камбендазол | 16,9 | 303,0 | 261,1/217,1 |
Камбендазол - D7* | 16,9 | 310,0 | 262,1 |
Оксибендазол | 16,9 | 250,2 | 218,1/176,0 |
Оксибендазол - D7* | 16,9 | 257,1 | 225,2 |
Альбендазола сульфон | 17,4 | 298,1 | 224,1/104,1 |
Альбендазола сульфон - D3* | 17,4 | 301,2 | 224,1 |
Метил-карбамат* | 18,2 | 308,2 | 240,1/208,1 |
Оксфендазол | 18,4 | 316,2 | 191,0/159,2 |
Оксфендазол - D3* | 18,4 | 319,1 | 194,1 |
Оксфендазола сульфон | 19,5 | 332,2 | 300,2/159,2 |
Фенбендазола сульфон - D3* | 19,5 | 335,1 | 300,1 |
Парбендазол | 19,7 | 248,2 | 216,1/173,2 |
Альбендазол | 20,1 | 266,1 | 234,2/191,1 |
Альбендазол - D3* | 20,1 | 269,2 | 234,1 |
Мебендазол | 21,0 | 296,1 | 264,1/105,1 |
Мебендазол - D3* | 21,0 | 299,1 | 264,1 |
Флюбендазол | 21,9 | 314,1 | 282,1/123,1 |
Флюбендазол - D3* | 21,9 | 317,1 | 282,1 |
Фенбендазол | 23,2 | 300,0 | 268,1/159,2 |
Фенбендазол - D3* | 23,2 | 303,0 | 268,1 |
Празиквантел | 24,9 | 313,2 | 203,1/83,2 |
Фебантел | 26,7 | 447,1 | 415,1/383,0 |
Фебантел - D6* | 26,7 | 453,1 | 383,1 |
Нетобимин | 27,7 | 421,1 | 389,1/213,2 |
* Внутренний стандарт. | |||
Таблица 4 - Параметры воздействия на ионы в режиме MRM и условиях электрораспыления с регистрацией отрицательных (-) ионов
Антгельминтик | Время удерживания, мин | Ион предшественник, m/z | Дочерние ионы, m/z* |
Клорсулон | 14,2 | 342,0/344,0 | 242,0/244,0 |
Нитроксинил | 15,2 | 290,1 | 162,9/126,8 |
Аминотриклабендазол | 15,8 | 327,1 | 182,0/146,0 |
Кетотриклабендазол | 16,4 | 327,1 | 182,0/146,0 |
Триклабендазола сульфоксид | 16,8 | 373,1/375,1 | 358/360 |
Триклабендазола сульфон | 17,1 | 391/389 | 312,1/309,9 |
Оксиклозанид | 17,7 | 194,9/196,9 | 158,8/160,8 |
Триклабендазол | 17,8 | 357,1/359,1 | 342,0/344,0 |
Триклабендазол - D3* | 17,8 | 362,1 | 344,0/197,0 |
Никлозамид | 17,8 | 325,0/327,0 | 289,0/291,0 |
Клозантел | 19,9 | 661,1/663,1 | 315,0/317,0 |
Салантел | 20,8 | 636,0 | 344,9/264,0 |
Рафоксанид | 21,6 | 623,8 | 344,9/126,9 |
* Внутренний стандарт. | |||